康腹止泻片微生物限度检查法验证.docVIP

　　康腹止泻片微生物限度检查法验证 作者：朱文娟，林铁豪，钟燕飞，林丽英 【摘要】 目的 建立康腹止泻片微生物限度检查法。方法 采用培养基稀释法。结果 该法能有效消除康腹止泻片在检验条件下对细菌、真菌及酵母菌的抑制作用;控制菌可用常规法检查。结论 该法简单、快捷，可用于康腹止泻片的微生物限度检查，有效控制其质量。 【关键词】 康腹止泻片;微生物限度检查;培养基稀释法 　Abstract:Objective To establish a method for microbial limit test of Kangfuzhixie pills.Methods Culture medium diluted method edium diluted method can eliminate the pills′ inhibiting effect on bacteria,fungi,yeast and examine designated microbial species.Conclusion This method is simple,accurate,feasible and suitable for microbial limit test and quality control of Kangfuzhixie pills. 　　Key icrobial limit test; culture medium diluted method 　　 康腹止泻片是由木馏油、老鹳草粉、黄柏干浸膏等药材经加工而成的中成药片剂。本品味特异，具有化滞止泻功效。用于饮食不节或水土不服导致的食欲不振、恶心呕吐、腹胀腹泻、消化不良等症。处方中的老鹳草、黄柏具有一定的抑菌作用[1，2]，若用常规法对其进行微生物限度检查，结果将不能真实反映样品的污染情况[3]。为此，根据《 中国 药典》2010年版的有关规定[4]，对康腹止泻片微生物限度检查方法进行验证，以确定其是否适用于本品的微生物限度检查，从而准确有效地检出样品中污染的微生物[5]。验证表明，采用培养基稀释法对本品进行检查，可使污染的微生物能被顺利检出，常规法则可用于控制菌的检查。该方法简便、快捷、准确、可行，能有效控制康腹止泻片的质量，并可为同类药品的微生物限度检查法提供 科学 的实验依据。 　　 1 仪器与试药 　　1.1 菌种 　　金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003]、大肠埃希菌[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501]、白色念珠菌[CMCC(F)10123]，均购自中国药品生物制品检定所;黑曲霉(ATCC16404)购自广东省微生物研究所。 　　1.2 培养基 　　营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、改良马丁培养基、改良马丁琼脂培养基、胆盐乳糖培养基。 　　1.3 供试品 　　康腹止泻片(批号41EA1)，大幸药品株式会社。 　　 2 方法与结果 　　2.1 菌液的制备[4] 　　2.1.1 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌 　　取新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中，培养18～24 h;培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 mL含菌数为50～100 cfu的菌悬液。用于控制菌验证时制成每1 mL含菌数为lt;100 cfu的菌悬液。 　　2.1.2 白色念珠菌 取新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，培养24～48 h;培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1 mL含菌数为50～l00 cfu的菌悬液。 　　2.1.3 黑曲霉 取新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基中，培养5～7 d，加入0.9%无菌氯化钠溶液3～5 mL，将孢子洗脱。然后，用适宜的方法吸出胞子悬液至无菌试管内，用0.05%(体积分数)聚山梨醇的0.9%(体积分数)无菌氯化钠溶液制成每l mL含孢子数50～100 cfu的孢子悬液。 　　2.2 供试液的制备 　　取样品10 g，加入pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液至100 mL，用匀浆仪打碎，摇匀，制成1∶10的供试液。 　　2.3 验证试验 　　验证实验所用培养基均按《 中国 药典》2010年版附录“微生物限度检查法”要求，进行培养基适用性检查，且均符合规定。 　　2.3.1 细菌、真菌及酵母菌计数(平皿法培养基稀释法) 在确定适合的检查方法后，验证试验至少应进行3次独立的平行试验，并分别 计算 各试验菌每次试验的回收率。 　　试验组:各取1∶10供试液1、0.5、0.2 mL和试验菌液1 mL，分别注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，按平皿法测定其菌数。 　　菌液组:取试验菌液1 mL注入平皿中，立即倾注相应琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所加的试验