当归加玻璃酸钠关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨细胞Bcl2、Bax表达的影响.docVIP

　　当归加玻璃酸钠关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨细胞Bcl2、Bax表达的影响 作者：刘仕良 杨帆 段祥林 易晨阳 【摘要】 目的：研究当归注射液结合玻璃酸钠注射液关节腔注射对兔膝骨关节炎软骨软骨细胞Bcl2、Bax表达的影响。方法：健康家兔50只随机分为5组, 正常对照组、模型对照组、当归组、玻璃酸钠组、当归与玻璃酸钠结合组，每组10只，后4组按Hulth方法建立兔膝骨性关节炎的动物模型，术后每周经膝关节穿刺给药1次，连续给药6周后处死、取材，关节软骨作大体及光镜观察，检测软骨细胞Bcl2(Bcell lymphomas, B淋巴细胞2蛋白)、Bax（Bcl2 Associated X protEin, B淋巴细胞2的相关X蛋白）的表达灰度。结果：各药物预防组动物关节软骨的大体观察评分、组织学评分、软骨细胞Bax的表达灰度均低于模型组（均Plt;0.01），软骨细胞Bcl2的表达灰度均高于对照组（均Plt;0.01），当归与玻璃酸钠合用组效果更佳（均Plt;0.05）。结论：当归注射液和玻璃酸钠注射液关节腔注射对软骨细胞的退变有显著的减缓作用，尤以两者合用时显著。 【关键词】 骨性关节炎； 当归； 玻璃酸钠； 细胞凋亡 骨关节炎（Osteoarthritis，OA）是一种严重危害老年人健康的慢性进行性骨关节病，关节软骨退行性改变是骨关节炎的特征性病理改变。成人或成年动物的软骨一旦发生退变，目前尚无理想的方法使其获得满意的修复以恢复正常的生理功能。故OA的预防尤显重要，玻璃酸钠注射液(sodium hyaluronate，SH)与当归注射液（Angelica，AG）关节内注射均具有防治OA的作用［1，2］，但效果均有限。本实验采用SH与AG结合用膝关节腔内注射，观察其对兔膝骨关节炎软骨细胞Bcl2、Bax表达的影响，并对相关机制进行探讨。 1 材料与方法 1.1 药物、试剂与仪器 25%当归注射液（武汉大学中南 医院 制药厂），SH注射液(25g/2.5l，上海麦迪克医学科技公司)； Bcl2蛋白、Bax蛋白抗体，SABC、DBA试剂盒（武汉博士德）。765紫外分光光度计(Shimadzu UV12002)，HPIAS_1000 高清晰度彩色病理图像分析系统（同济千屏）。健康家兔50只，22～30kg，雌雄兼用（武汉大学实验动物中心提供），随机分为5组:正常对照组、模型对照组、当归组、玻璃酸钠组、当归与玻璃酸钠结合组。 1.2 实验过程及给药方法 参照 .L.编辑。 2.2 光镜观察HE、甲苯胺兰染色及评分 模型组切片光镜观察：软骨表面有小裂纹与溃疡，细胞明显增生，大小不一，四层结构紊乱，潮线不清晰或多重，甲苯胺兰染色重度降低；正常组切片光镜观察：软骨表面光滑、完整，细胞排列整齐，四层结构清晰，潮线清晰完整，甲苯胺兰染色基本正常。AG、SH、SH+AG 3组切片光镜观察：软骨表面光滑、完整，细胞排列稍有紊乱，四层结构清晰，潮线清晰完整，甲苯胺兰染色着色正常或轻度降低。按Mankins标准评分并进行统计（表1），结果显示：与模型组比较时，AG、SH、SH+AG 3个 治疗 组均降低了Mankins评分（Plt;0.05 ，Plt;0.05，Plt;0.01），SH+AG治疗组与AG、SH两组有明显差异（均Plt;0.05）。表1 各组软骨组织mankins评分 注：与模型组比较，# Plt;0.05；* Plt;0.01。 2.3 免疫组化及图像分析 切片用DBA染色的阳性结果为软骨细胞胞浆呈棕褐色或棕黄色颗粒，阴性胞浆不着色或仅有背景着色。相对于模型组，AG和SH治疗组软骨细胞Bax表达的灰度值显著降低（Plt;0.01），Bcl2表达的灰度值显著增加（Plt;0.01）；AG和SH两组无明显差别（Pgt;0.05），SH+AG结合组比单纯的AG或SH治疗组效果更显著（均Plt;0.05），结果见表2。表2 Bcl2、Bax在各组软骨表达的灰度值 3 讨论 关节软骨正常的形态结构及功能是维持关节生理功能的重要因素，本实验通过改变膝关节生物力学状态以诱导关节软骨退变而形成OA，模型对照组的各项指标观察结果显示造模是成功的。 现代 药理研究证明: 当归注射液是中药当归水煮醇沉后提取的水溶性成分，它可清除氧自由基、抗氧化,可促进巨噬细胞能力,提高免疫功能,还具有改善末梢神经和微循环等功能［5］ 。 对于OA的发病机制，目前尚未完全研究清楚。一般认为OA的发生与软骨细胞过度凋亡密切相关，并受相关基因调控。Ba蛋白为促凋亡基因蛋白，Bcl2家族为目前发现的最重要的抗凋亡基因蛋白。Bcl2蛋白抗凋亡作用与其跨膜蛋白抑制Ca++超载，阻止凋亡基因信号传递或基因