当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子表达的影响.docVIP

　　当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子表达的影响 【摘要】 目的研究当归对宫内缺氧后新生大鼠肾脏内血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法将孕期14 d的SD大鼠随机分为对照组、缺氧组和当归 治疗 组。缺氧组孕鼠自孕第14 天开始每天一次经尾静脉注射生理盐水8 ml/kg（连续7d），后用低张性缺氧模型致胚鼠宫内缺氧2 h（连续3 d：孕期第14，15，16天）；当归治疗组用250 g/L的当归注射液代替生理盐水，其余处理同缺氧组；对照组不缺氧，其余同缺氧组。3组孕鼠分娩当日取肾组织、多聚甲醛固定，石蜡包埋切片、VEGF免疫组化、400倍拍照、IPP6.0软件图像分析。结果缺氧组新生鼠VEGF 阳性细胞的数量和积分光密度值均较对照组增大 (P＜0.05)，当归组VEGF 阳性细胞数量和积分光密度值均较缺氧组减小(P＜0.05)。结论一定时间、一定氧浓度的宫内缺氧可刺激新生大鼠肾脏VEGF的表达增加 ；而当归注射液可使VEGF的表达下降。 【关键词】 当归； 缺氧； 肾； 血管内皮细胞生长因子 血管内皮生长因子(vascular endothelial grol/kg（孕第14～20 天，连续7 d），1h后放入设置好的三气培养箱(氧体积分数130 ml／L，温度25℃ ，二氧化碳体积分数0.4～0.6 ml／L)内缺氧2 h，连续缺氧3d(孕第14～16天)，第17，18，19，20天仍给予当归注射，但不缺氧。缺氧组用生理盐水代替当归注射液，其余同当归组。对照组不缺氧，余同缺氧组。 　　2.3 取材、石蜡切片及VEGF免疫组织化学测定 　　每组随机选取15个新生鼠肾脏，然后进行常规石蜡包埋，经肾脏冠状切面切片（片厚4 μm），每组切片脱蜡至水，各组随机取12张切片分别作VEGF(1∶200）免疫组化染色(常规链酶亲和素一生物素一过氧化物酶复合物法)。其余切片做HE染色，免疫组化切片在400倍显微镜下观察肾脏皮质，每张切片随机选取5 个视野,每个视野随机选取3～5 个近曲小管。采用OLYMPUS Bx-70荧光显微镜成像系统拍照，经Image-Pro Plus5.1图像分析系统对阳性细胞进行图像分析。 　　2.4 统计学处理各组间比较 　　用方差分析，两两比较用LSD法检验。采用SPSS13.0软件包完成数据分析（Plt;0.05）。 　 　3 结果 　　3.1 对照组VEGF免疫组化反应阳性细胞分布呈区域性，大多位于肾远曲小管上皮细胞，胞质中有棕黄色颗粒 （图1a及表1）。 　　3.2 缺氧组VEGF免疫组化反应阳性细胞分布区域与对照组相似，与对照组相比缺氧组阳性细胞染色增强、阳性细胞数量增加、积分光密度值增大（P＜0.05）（见图1b及表1）。 　　3.3 当归治疗组VEGF免疫组化反应阳性细胞分布与对照组相似，与缺氧组相比缺氧组阳性细胞染色减弱、数量减少、其积分光密度值减小（P＜0.05）（见图1c，表1）。表1 3组新生鼠肾脏皮质区VEGF免疫组化结果（略） 　 　4 讨论 新生儿窒息是新生儿死亡和伤残的主要病因之一，本病致死致残的主要原因是缺氧导致新生儿心、脑、肾等多种脏器损伤所致，由于肾血流量大，能量消耗大，因此肾对缺血缺氧比较敏感。许多组织器官在低氧环境下，都可以诱导血管内皮生长因子VEGF的表达，使毛细血管代偿增生，缓解缺氧状态［2］，目前有关在体状态下缺氧对肾脏组织内VEGF表达的影响研究较少，因此，对缺氧后肾组织VEGF表达变化的研究将有助于阐明缺氧引起肾损伤的发生机制。 　　肾脏有一套具特殊形态和功能的血管系统，在人肾发育过程中,肾小球、肾小管结构形成的同时,肾的血管也开始发生。起诱导分化作用的间质产生血管发生因子,分化的肾小球上皮细胞产生VEGF ,此时,肾小球内皮细胞表达丰富的VEGF受体（Flt21 和KDR mRNA ）,内皮细胞被吸引入肾小球并向内生长。与此类似,集合管上皮细胞产生VEGF ,皮髓质肾小管周毛细血管内皮细胞存在VEGF 受体,促使肾小管周毛细血管发生。在新生鼠肾脏发育时,抗体阻断内源VEGF ,动物的肾皮质表层的血管形成受阻,发育的肾单位数目明显减少,有许多缺乏毛细血管丛的异常肾小球，说明VEGF 在肾脏发育尤其肾小球形成中起重要作用。本研究在HE染色切片上，观察到缺氧组肾近曲小管上皮细胞体积变大，胞浆可见颗粒状物，管腔变窄，部分核碎裂、溶解，出现了明显水肿，说明3 d(2 h/d)缺氧后，导致了肾脏结构的形态学改变。另外在肾脏免疫组化染色切片上观察到缺氧3 d(2 h/d)组胚鼠肾脏VEGF免疫组织化学反应增强、阳性细胞增多，说明缺氧后VEGF表达量增加，但随着氧浓度和缺氧时间的变化，VEGF在肾脏的表达尚需进一步的研究。缺氧状况下，