慢性房颤患者心肌瞬时外向钾通道电流密度变化.docVIP

　　慢性房颤患者心肌瞬时外向钾通道电流密度变化 作者：李忠稳　陈丽　孔德虎　柯道平　杨艳　曾晓荣 【摘要】 目的 旨在研究慢性房颤患者心房肌瞬时外向钾通道电流的变化，为房颤机制的阐明提供更多的实验依据。方法 心房肌标本取材于体外循环手术患者右心耳。采用全细胞膜片钳技术研究心房肌瞬时外向钾通道电流密度的变化。结果 慢性心房颤动患者心房肌瞬时外向钾通道电流密度降低，在测试电位-20 mV以上各电位水平时均有显著性差异(n=16，Plt;0．05)。结论 慢性房颤时瞬时外向钾电流密度降低对房颤的电重构起一定的作用。 　　【关键词】瞬时外向钾通道；膜片钳；人体心房肌细胞；心房颤动 　　 　　心房颤动是一种常见的慢性心律失常，60岁以上人群中的发病率为2%~4%，随着人口的老龄化，心房颤动变得更加常见 [1] 。心房有效不应期的缩短 [2-4] 和折返环的存在 [5-7] 在心房颤动中起重要作用。瞬时外向钾通道电流(Ito)是复极早期的主要电流，对于动作电位的形态和调节非常重要，对动作电位时程和有效不应期的改变起重要作用。 　　本文旨在研究慢性房颤患者心房肌Ito的变化，为阐明心房颤动的机制提供更多的实验依据。 　　1 资料与方法 　　1．1 实验对象 随机分为两组:慢性心房颤动组(AF组)和窦性心律组(SR组)，AF组6例，SR组10例,患者均来自三级 医院 ，通过χ 2 检验比较性别、年龄、房颤持续时间、心功能、心脏各腔室直径两组间无显著差异。 　　1．2 心肌细胞的分离 心肌标本取材于体外循环手术时患者的右心耳，质量50~100 mg。标本采用无钙离子、100%氧饱和的心肌麻痹液保存送往实验室。心肌麻痹液含有(mM)：KH 2 PO 4 50，MgSO 4 8，Adenosine 5，HEPES 10，Glucose 140，Mannitol 100，Taurine 10(pH 7．4)。标本切成小块后用EGTA液清洗脱Ca 2+ 。EGTA液含有(mM)：NaCl 137,KH 2 PO 4 5，MgSO 4 1,Glucose 10，HEPES 5，Taurine 10，EGTA 0．1(pH 7．4)。然后将标本放入含有150 U/ml胶原酶(V型,Sigma)、12．6 U/ml蛋白酶(XXIV型,Sigma)和1 mg/ml 白蛋白(Sigma)的EiM液中，维持35℃，持续冲以100%氧气，消化一段时间。EIM液含有(mM)：NaCl 137，KH 2 PO 4 5,MgSO 4 1,Glucose 10,HEPES 5，Taurine 10(pH 7．4)。之后用不含酶的EIM液洗1 min，去掉上清液，再用只含胶原酶的EIM液消化，直到镜检出现杆状的细胞为止。细胞用KB液保存备用。KB液含有(mM)：KCl 20，KH 2 PO 4 10，Glucose 25，Mannitol 5，Albumin 1，L-Glutamic acid 70，β-hydroxybutyrate 10，Taurine 10，EGTA 10,(pH7．4)。 　　1．3 I to 记录 选用静止、杆状、横纹清楚的细胞,采用全细胞电压钳制技术记录I to 。玻璃微电极尖端电阻2~4 MΩ。电极内液含有(mM)：KCl 20，K-aspartate 110，MgCl 2 1，HEPES 10，EGTA 5，Phosphocreatine 5(pH7．2)。细胞浴液含有(mM)：NaCl 136，KCl 5 ．4，CaCL 2 2，MgCl 2 1，NaH 2 PO 4 0．33，HEPES 5，Glucose 10，CoCl 2 3。电极连接于膜片钳放大器(Axopatch 200B，Axon Instruments)，数据通过数模转换器(Digidata 1200，Axon Instruments)连于 计算 机进行记录与分析。采样频率10 kHz，低通滤波频率2 kHz。形成封接以前把电极电位调至零，吸破细胞膜形成全细胞构型后，补偿串联电阻使其最小化。记录时浴液的温度为22℃~25℃，钳制方案见图1。 　　1．4 统计学方法 实验结果中计量资料均以均数±标准差(x±s)表示，采用t检验，以Plt;0．05为差异有统计学意义。数据处理采用SPSS 11．0软件。 　　2 结果 　　记录到的电流为四氨基吡啶(4-AP)敏感的电流，2 mM 4-AP可特异性的阻断此电流。通??比较电流密度来排除细胞体积大小的影响，电流密度为电流幅度除以细胞膜电容，单位为pA/pF。细胞膜电容AF组为(44．2±2．1)pF，SR组为(50．2±2．3)pF，组间比较没有显著性差异。I to 电流密度在测试电