抗环斑病毒转基因番木瓜55.docVIP

　　抗环斑病毒转基因番木瓜55 【关键词】 ,转基因；番木瓜55-1； 　　摘要： 目的 建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检测 方法 。方法 采用改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取，根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS-35S)序列设计合成特异性检测引物，采用PCR技术对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定。结果 内源Papain基因PCR扩增结果表明，改良CTAB法及试剂盒方法都可用于番木瓜种籽及果肉的DNA提取。实验中合成的引物及建立的PCR反应体系、反应参数能特异性地扩增转基因番木瓜55-1的外源基因35S-GUS序列和NOS-35S序列。该方法的绝对检测低限为815×10-2ng，相对检测低限为014％。结论 本检测方法有较高的稳定性，能有效地对转基因番木瓜55-1进行品系鉴定，该方法的检测灵敏度可完全满足转基因食品标识管理定性检测的需要。 　　关键词： 转基因；番木瓜55-1； 　　PCRPCR for event-specific detection of transgenic virus resistant papaya 55-1 　　Abstract： Objective PCR assay ethyl Ammonium Bromide(CTAB) method and Qiagen DNeasy plant mini kit papaya seed and fruit.Specific primers for PCR detection of papaya 55-1 plify endogenous papain gene sequence and external segments,35S-GUS and NOS-35S,and corresponding detection methods plification of papain gene indicated that both the developed CTAB method and Qiagen DNeasy plant mini kit papaya seed and fruit.Results of amplification of the external segments (35S-GUS and NOS-35S) indicated that the developed method it of detection (LOD)of the method got to 8.15×10-2 ng and 0.14% respectively.Conclusion The developed PCR method can detect transgenic virus resistant papaya 55-1 specially and detective sensitivity can satisfy the need of qualitative detection for geically modified foods. 　　Key odified;papaya 55-1;PCR 　　番木瓜属热带亚热带重要水果，为有效控制番木瓜环斑病毒(PRSV)对番木瓜产业的威胁，1998年世界上第1个转基因番木瓜品系――抗环斑病毒转基因番木瓜55-1在美国和加拿大获准商业种植〔1，2〕。从此转基因番木瓜55-1以其独特的抗病优势被广泛种植，每年都有大量转基因番木瓜流入国际水果市场。本 研究 采用改良十六烷基-三甲基-溴化铵(CTAB）法及试剂盒方法进行番木瓜基因组DNA提取，根据番木瓜管家Papain基因和抗环斑病毒转基因番木瓜55-1品系的外源结构基因(35S-GUS)和调控基因(NOS-35S)序列设计合成特异性检测引物，采用PCR技术，建立对抗环斑病毒转基因番木瓜55-1进行品系鉴定的检验方法，为今后转基因番木瓜的标识管理及安全性评价提供技术支持。 　　1 材料与方法 　　11 材料 转基因番木瓜55-1种籽由香港政府化验所友情提供。市场抽检番木瓜购自深圳市翠竹万佳超市及深圳市田贝一路街边水果店。 　　12 仪器和试剂 MJR PTC-220扩增仪，SynGene Gene Genius凝胶成像系统，Eppendorf Biophotometer核酸蛋白 分析 仪。植物DNA提取试剂盒(美国Qiagen公司)；TaqDNA聚合酶、UNG酶(美国Promega公司)。 　　13 DNA提取 　　131 样品前处理 取番木瓜种籽， 自然 晾干后破碎至约05mm左右备用。番木瓜果肉直接