抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响.docVIP

　　抗肺癌合剂对Lewis肺癌的抑制作用及VEGF表达的影响 作者：吴敏华，周维顺，谢长生 【摘要】 ：［目的］ 观察抗肺癌合剂对C57BL/6小鼠Leouse Lea and on the expression of VEGF in tumor tissue. ［Methods］ C57BL/6 mice a cell at right armpit and divided into groups. Different groups inistered by MAALC (loal and high dose), CTX or saline. After 15 days, all mice ors then . After that, or tissue munohistochemistry stain, detected the integral optical density of VEGF expression age analytical technique. ［Results］ pared odel group, the average ors of the high dose group a，and can degrade the expression level of VEGF in tumor tissue. 　　Key s; VEGF; TCM therapy 肺癌是目前最常见的恶性肿瘤，近年其发病与死亡呈明显上升趋势，严重危害人民健康，对其防治任重道远。诸多研究表明，中医药在抗肿瘤生长与转移，对放化疗的增效减毒，提高机体免疫功能，改善症状、提高生存质量上有其自身的优势。抗肺癌合剂是周维顺教授通过长期临床实践创立的经验方，主要用于肺癌病人，并在临床使用中取得了较好的疗效，为进一步验证其效果，并初步探讨其可能的作用机制，本研究从动物实验角度, 观察抗肺癌合剂对C57BL/6小鼠Leg/支，批号用时以生理盐水临时配制成浓度为2 mg/ml。小鼠抗鼠VEGF单克隆抗体、PV6001/6002 Pom3碎块，置于匀浆器中研磨，并以200目滤膜过滤到无菌烧杯内，加生理盐水稀释成1:3的瘤细胞悬液。用移液枪吸取细胞悬液约20μl置于无菌试管内，用生理盐水稀释100倍，加0.2%台盼兰染色后，吸取少许置于细胞计数板上，放于低倍显微镜下观察，计算活细胞数。以生理盐水稀释，调整细胞悬液浓度为1×107个瘤细胞/ml。50只C57BL/6小鼠右腋皮下各接种瘤细胞悬液0.2 ml。接种24h后，随机分成5组：模型组、中药高剂量组、中药中剂量组、中药低剂量组、环磷酰胺组，每组各10只。 　　 1.4 给药方法 　　造模后第2天开始给药，给药剂量参照陈奇推荐的药量换算法［2］，中药高、中、低剂量组每天分别予相当于生药120g/kg、60g/kg和30g/kg的抗肺癌合剂灌胃；模型组每天以生理盐水灌胃；灌胃容积为0.4ml/10g，均连续灌胃14d。CTX组隔天腹腔注射1次CTX，剂量为20 mg/kg/天［3］，共6次。 　 　1.5 观察抑瘤率及瘤组织VEGF表达 　　各组小鼠分别于实验第15d处死，取瘤组织称重，根据公式：抑瘤率%=（C-T）/C×100%（T为实验组的平均瘤重，C为模型对照组的平均瘤重），计算抑瘤率。SP二步法制备肿瘤组织免疫组化病理切片。 参考 Kraan［4］等方法对免疫组化染色切片细胞浆表达的VEGF进行定量分析。采用Leica QWin Standard V2.8自动图象分析系统，以VEGF阳性表达的平均积分光密度作为统计指标［5］。积分光密度＝平均光密度×阳性面积。 　　 1.6 统计学方法 　　用SPSS13.0统计软件分析处理。计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示。多组间均数的比较用方差分析，每两组间均数比较采用q检验。以Plt;0.05为显著性差异，Plt;0.01为非常显著性差异。 　 　2 结果 　　2.1 平均瘤重和抑瘤率 　　实验中，1只实验小鼠死于CTX毒性反应，1只死于灌胃操作。各组小鼠平均瘤重和抑瘤率如表1。由表1可见，中药高剂量组抑瘤率达29.8%，平均瘤重与模型对照组相比有显著性差异(Plt;0.05)；中药低、中剂量组平均瘤重与模型组无显著性差异（Pgt;0.05）。表1 各组小鼠平均瘤重(x±s)和抑瘤率（略） 　　 2.2 肿瘤组织VEGF表达 　　各组小鼠接种部位瘤组织VEGF阳性表达的平均积分光密度如表2。从表2可见在肿瘤组织VEGF表达的平均积分光密度上，中药高剂量组与模型对照组比较有显著性差异（Plt;0.05）；中药低、中剂量组与模型组比较无显著性差异(Pgt;0.05)。表2 各组小鼠肿瘤组织V