新生霉素结构单元合成与抗肿瘤活性.docVIP

　　新生霉素结构单元合成与抗肿瘤活性 【摘要】 目的 研究 新生霉素的结构单元诺维糖和香豆素的抗肿瘤活性。 方法 合成新生霉素的结构单元3-O-氨基甲酰基诺维糖（化合物2）和3-乙酰氨基-7-羟基香豆素（化合物3）,MTT法测定两化合物与新生霉素抗K562细胞的活性。 结果 化合物2的IC50为2.287 mmol,化合物3的IC50为2.165 mmol,新生霉素的IC50为0.350 mmol。 结论 化合物2和化合物3具有抗肿瘤活性,但比新生霉素弱。 【关键词】 新生霉素; 诺维糖; 香豆素类; 抗肿瘤药 ABSTRACT: Objective To study the antitumor activity of noviose and coumarin in novobiocin. Methods Synthesis 3-O-carbamylnoviose and 3-acetamido-7-hydroxycoumarin, pare the activity of inhibit K562 cell aximal inhibitory concentration(IC50): pound 2 mol/L, pound 3 mol/L, novobiocin mol/L. Conclusion Noviose and coumarin have a little antitumor activity but it is arins; antineoplastic agents 新生霉素(novobiocin)是香豆素类抗生素的代表药物,对DNA回旋酶有很好的抑制作用,对多种癌细胞有抑制作用,并能与抗癌药联合 应用 ,逆转抗癌药的耐药性。Bergerat等研究表明新生霉素能显著减少细胞内P185erb2、p60v-src、Raf-1和突变型P53的水平,并且点突变实验证明新生霉素是Hsp90的C-端抑制剂［1］。但新生霉素作为Hsp90的抑制剂所用的浓度高达700 μmol/L,Blagg等合成一系列新生霉素衍生物,均由诺维糖和香豆素这两个结构单元成糖苷得到,筛选得到衍生物A3抑制Hsp90浓度仅为10 μmol/L［2］。为了解该结构单元诺维糖和7-羟基香豆素的抗肿瘤活性,得到更详细的构效关系,并在此基础上合成活性更高的新生霉素衍生物,笔者合成3-O-氨基甲酰基诺维糖(化合物2)和3-乙酰氨基-7-羟基香豆素(化合物3,结构式见图1)。3-O-氨基甲酰基诺维糖合成路线以Olson报道的从新生霉素直接酸性条件下苷解,再脱保护最为简洁(合成路线见图2),故按此路线合成［3-4］。 3-乙酰氨基-7-羟基香豆素的合成按 1.2.2 药理实验 1.2.2.1 细胞培养 人慢性粒细胞白血病(CML)细胞株K562(中科院上海细胞 研究 所),培养于含10%新生牛血清,100 IU/mL青霉素,100 μg/mL链霉素的RPMI 1640培养液,在37 ℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度的二氧化碳培养箱培养。取指数生长期的K562细胞用于实验。实验前24 h细胞传代一次,24 h后??胞即进入指数生长期。 1.2.2.2 MTT法观察新生霉素、化合物2、化合物3对细胞增殖的抑制作用 在96孔培养板上,接种K562细胞,每孔接种量(0.5～2)×104个,每孔200 μL,实验组分别加入不同浓度的新生霉素、化合物2、化合物3,对照组不加药,另设空白组(只加培养基,无细胞),每组设3个平行孔,37 ℃培养至所需时间,每孔加入5 mg/mL的MTT溶液20 μL,继续培养4 h,离心弃上清,加入DMSO 150 μL,振荡10 min,充分裂解后,用全自动酶标仪(美国BIO-RAD公司)检测570 nm处的光密度(D570 nm)值。根据光密度 计算 细胞生长抑制率。 细胞生长抑制率=［D对照组-D实验组］/［D对照组-D空白组］×100% 以同一药物的不同浓度对肿瘤细胞生长抑制率作图,可得到剂量-反应曲线,根据线性回归方程求出该药物的半数抑制浓度IC50,即细胞存活率减少50%时的药物浓度。 2 结 果 2.1 合成实验 化合物2、化合物3的核磁、质谱由 中国 科学 院福建物质结构研究所测试,得到的核磁特征峰、质谱数据与 参考