木糖醇注射液细菌内毒素检查法的建立.docVIP

　　木糖醇注射液细菌内毒素检查法的建立 【摘要】 目的 建立快速准确检出木糖醇注射液中细菌内毒素鲎试剂检查法。 方法 用不同厂家的鲎试剂对不同批号的木糖醇注射液分别进行干扰试验，考察确立木糖醇注射液细菌内毒素检查法。结果 木糖醇注射液经1：2倍稀释后可消除干扰。结论 使用灵敏度为0.5EU/ml的鲎试剂对木糖醇注射液进行细菌内毒素检测是可行的。 【关键词】 木糖醇注射液；鲎试剂；细菌内毒素 《 中国 药典》2005年版二部细菌内毒素检查法的品种达112种，该法以其所具有的特异灵敏、简便、快速、重现性好等优点，正逐渐取代家兔法。笔者通过实验探讨以细菌内毒素检查法取代热原检查法检测木糖醇注射液的可行性，并与家兔法进行了对照。 1 试验材料 木糖醇注射液（酒泉制药厂生产，规格：250ml：25g，批号：0508081， 0508082，0508091，0508092）；鲎试剂（福州新北生化 工业 有限公司生产，批号标示灵敏度：0.5EU/ml）；鲎试剂（厦门鲎试剂实验厂，批号：040427，标示灵敏度：0.5EU/ml）；细菌内毒素工作标准品（福州新北生化工业有限公司，批号：041217，规格：10EU/ml）；细菌内毒素检查用水（福州新北生化工业有限公司，批号：050303，每支2ml）。家兔由酒泉制药厂动物室提供，实验所用仪器均符合《中国药典》2005年版二部要求。 2 方法 2.1 鲎试剂灵敏度复核试验〖1〗 根据鲎试剂灵敏度的标示值（λ），将细菌内毒素工作标准品用细菌内毒素检查用水溶解，在旋涡混合器上混匀15min，然后制成2λ、1λ、0.5λ和0.25λ4个浓度的内毒素标准溶液，每稀释一步均在旋涡混合器上混匀30s。取复溶后的0.1ml/支规格的鲎试剂原安瓿18支，其中16管分别加入0.1ml不同浓度的内毒素标准溶液，每一内毒素溶液平行做4管；另外2管加入0.1ml细菌内毒素检查用水作为阴性对照。将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃的恒温水浴箱中，保温60±2min。 2.2 细菌内毒素限值（L）的确定 木糖醇注射液临床一次最大剂量为50g，故 M=50g/60（㎏·h）=0.8g/（kg·h）静脉注射剂的制热阈值K=5EU/（kg·h）,按以下公式确定：L=K/M=5EU/（kg·h）/ 0.8g/（kg·h）=6.25EU/g。 2.3 最大有效稀释倍数 计算 MVD=c L/λ=（25g/250ml）·（6.25 EU/g）/（0.5EU/ml）=1.25。 2.4 干扰试验 将3批供试品溶液分别稀释1：2倍，得到供试品的稀释液。用细菌内毒素检查用水和供试品稀释液分别将同一支细菌内毒素工作标准品制成2λ、1λ、0.5λ和0.25λ四个浓度的细菌内毒素标准溶液。另取细菌内毒素检查用水和各批号供试品稀释液制成阴性对照管，用不同厂家灵敏度为0.5EU/ml的鲎试剂按2.1方法试验。 3 结果 3.1 鲎试剂灵敏度复核试验结果 将试管从恒温水浴箱中轻轻取出，缓缓倒转180°，管内凝胶不从管壁滑脱者为阳性，未形成凝胶或变形并从管壁滑脱着为阴性。结果，最大浓度2λ管均为阳性，最低浓度0.25λ管均为阴性。按下式λC=lg-1（∑X/4）， 计算 反应终点浓度的几何平均值，结果该批鲎试剂灵敏度的测定值λC在0.5λ～2λ范围内，可用于细菌内毒素检查。 3.2 干扰试验结果 从表1中计算得到的Es和Et值可以看出，Es均在0.5λ～2λ之间，且Et在0.5Es～2Es之间，根据《 中国 药典》2005年版二部规定，认为供试品溶液在该浓度下无干扰作用。 表1 木糖醇注射液干扰试验结果注：﹢为阳性，﹣为阴性。 4 样品细菌内毒素检查与热原检查的比较试验 4.1 方法 分别取3批样品用检查用水1：2稀释后作为供试品，取溶解后的0.1ml/支规格、灵敏度为0.5EU/ml的鲎试剂8支，其中2支加入0.1ml供试品作为供试品管，2支加入2λ内毒素工作标准品溶液0.1ml作为阳性管，2支加入0.1ml检查用水作为阴性管，2支加入供试品内毒素工作标准品溶液0.1ml作为供试品阳性管，将试管中溶液轻轻混匀后，封闭管口，垂直放入37℃±1℃的恒温水浴箱中，保温60±2min。对上述同样3批样品做热原检查，比较结果。 4.2 结果 见表2。表2 细菌内毒素检查法与热原检查法的结果注：﹢为阳性，﹣为阴性。 5 讨论 5.1 不受pH值的 影响 木糖醇注射液为一种营养输液，静脉给药对血糖无影响，但对胰岛素的分泌有促进作用。同时，能补充热量，改善糖代谢，具有改善代谢和消除酮血症的作用，临床用于糖尿病患者作为葡萄糖的代用品虼四咎谴甲⑸湟翰捎孟妇诙舅丶觳榉ㄎ扌璧鹘趐H值。