毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用.docVIP

　　毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用 【摘要】 目的 探讨毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用。 方法 用流感病毒亚甲型鼠肺适应株 A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠，建立小鼠流感病毒性肺炎的生物模型，采用ELISA方法测定肺组织悬液中的IL-4 和IFN-γ的活性水平，观察毒热平注射液对流感病毒感染小鼠的保护作用。结果 毒热平注射液各剂量组小鼠肺匀浆的IFN-γ活性水平明显升高而IL-4的活性显著下降；毒热平注射液的0.33 g /(kg·d)和0.17 g /(kg·d)剂量组对流感病毒感染小鼠具明显的保护作用。结论 毒热平注射液能通过调节细胞因子的活性，纠正Th1/Th2细胞失衡而发挥抗流感病毒作用。 【关键词】 毒热平；流感病毒；Th1/Th2；细胞漂移 　Abstract: Objective To explore the antivirus effect of Dureping Injection in mice. Methods The murine pneumonia model urine lung urine Death Rate ouse onia. Conclusion Dureping Injection has an obvious effect against influenza virus FM1 strain by correcting the Th1/Th2 cell shift, regulating the bioactivities of Th1 cytokines and the bioactivies of Th2 cytokines, g/mL，由广东省康美药业有限公司开发提供；阳性对照药：注射用双黄连(冻干粉)：600mg干粉/支，实验前用无血清DMEM培养液配制成40 mg/mL备用，批号：0501004(哈药集团中药二厂)；利巴韦林：100 mg/mL，批号：0506251(石药集团欧意药业有限公司)。 　　1.4 细胞因子检测试剂盒：购自美国Biosource公司。 　　2 方法和结果 　　2.1 流感病毒对小鼠半数致死量(LD50)的测定 取ICR小鼠50只，用单纯随机抽样法随机平均分成5组，病毒为2-6～2-105个稀释度，每只小鼠经乙醚轻度麻醉后分别滴鼻感染不同稀释度病毒液0.05mL，以死亡和生存为观察指标，24 h内死亡的不予统计。每天观察，直至感染后第14天为止。按Reed-Munch公式［2］ 计算 出病毒的半数致死量(LD50)为10-2.2。 　　2.2 对流感病毒所致小鼠死亡的保护作用 取ICR小鼠144只，随机分组、给药见表1。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水0.05mL滴鼻，其余各组以4 LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05 mL，于感染当天开始腹腔给药，正常对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续10 d。从感染之日算起，每天观察并记录小鼠感染病毒后的死亡数，连续观察15 d，计算死亡保护率［3］，结果见表1。表1 毒热平注射液对流感病毒致小鼠死亡的保护作用（略） 　　2.3 流感病毒感染小鼠肺匀浆细胞因子的检测(双抗体夹心酶标免疫 分析 法) 取ICR小鼠70只，随机分组、给药见表2。将各组小鼠用乙醚轻度麻醉，正常对照组以生理盐水0.05 mL滴鼻，其余各组以40 LD50流感病毒液滴鼻感染，每只0.05 mL，于感染后第2天开始腹腔给药，正常对照组在同等条件下注射生理盐水，每天1次，连续6 d，第7天摘眼球放血处死，在低温条件下，按常规方法制作肺组织匀浆，［肺重(g)/生理盐水(mL)=1/9］，离心(4 ℃，3000 r/min，30 min)后取上清［4］，放入-20℃冰箱中保存待测肺中细胞因子蛋白表达。采用双抗体夹心ABC-ELISA法检测，程序按照试剂盒说明书进行，结果见表2。表2 毒热平注射液对流感病毒感染小鼠肺匀浆细胞因子的影响（略） 　 　2.4 数据学 方法 　　率的比较采用确切概率法或χ2检验。计量资料组间比较用t检验。全部数据采用SPSS 11.0处理，P＜0.05为有统计学意义。　　2.5 结果 以上结果显示，毒热平注射液大、中剂量组对流感病毒感染小鼠具明显的保护作用，且毒热平注射液各剂量组均能升高IFN-γ的表达水平(P＜0.01)。病毒感染后，与正常对照组相比，细胞因子IFN-γ/IL-4的比值降低，Th1/Th2比例严重失衡；使用毒热平注射液干预后，与病毒对照组相比，该比值相应升高，Th1/Th2比例失衡得到一定纠正。实验组的IFN-γ/IL-4比值与双黄连组和利巴韦林组的比值相近。 　　3 讨论 毒热平注射液由黄芩、栀子等中药制成，是在长期临床实践