比浊法自动测定乙酰螺旋霉素片的效价.docVIP

　　比浊法自动测定乙酰螺旋霉素片的效价 【摘要】 目的 建立比浊法测定乙酰螺旋霉素片的方法。方法 金葡菌为实验菌，加菌量约0.5%(V/V)，(37±0.5)℃培养3.5～4.5h测定。结果 抗生素线性浓度为3.2～15.6μg/ml，平均回收率为100.7%(n=9)，RSD=1.4%。结论 本方法操作方便、快速，灵敏、可信限率低，结果准确，精密度好，可作为乙酰螺旋霉素片效价的测定方法。 【关键词】 效价； 比浊法； 乙酰螺旋霉素 ABSTRACT Objective To establish a turbidimetric method for the content determination of acetylspiramycin tablets. Method The test organism l～15.6 μg/ml and the average recovery ethod ination of Acetylspiramycin tablets. KEY ettler公司。1.2 菌株、样品、培养基与试剂 金葡菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26003、大肠埃希菌(Escherichia coli) CMCC(B)44103与肺炎克雷伯菌(Klebosiella pneumoniae)CMCC(B)46117均由中国药品生物制品检定所提供。 乙酰螺旋霉素标准品(批号130347200403，效价1315μg/ml)由中国药品生物制品检定所提供。乙酰螺旋霉素片(批号060511590、060610220，规格0.1g)为河南天方药业股份有限公司生产；乙酰螺旋霉素片(批号010060602，规格0.1g)为石药集团药业有限责任公司生产。 营养琼脂培养基(批与抗生素检定培养基III(批号060211)均为北京奥博星生物技术有限责任公司生产；0.9%氯化钠溶液和磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)均按中国药典2005年版二部附录［5］配制。 2 效价测定 2.1 管碟法 按中国药典2005年版二部方法［4］测定。 2.2 比浊法 (1)含菌培养基的配制 取金葡菌新鲜斜面培养物，接种于营养琼脂培养基小斜面上，置35～37℃培养18～20h，用0.9%氯化钠溶液洗下菌苔，并用0.9%氯化钠溶液稀释，使其在650nm波长处的吸光度约为1.0。取菌液约5ml加至培养基100ml中，摇匀，为含菌培养基。 (2)溶液的配制 标准品溶液 精密称取乙酰螺旋霉素标准品适量，加乙醇溶解后，加灭菌水稀释至1000μg/ml的溶液，作为贮备溶液；临用前再用磷酸盐缓冲溶液(pH7.0)稀释至实验浓度。 供试品溶液 精密称取研细后的乙酰螺旋霉素片适量，加乙醇溶解后，加灭菌水稀释至1000μg/ml的溶液，作为贮备溶液；其余稀释步骤同标准品溶液。 (3)培养与测定 分别精密吸取实验用标??品溶液和供试品溶液各1.0ml，加入灭菌培养管中，再加入含菌培养基9.0ml，置抗生素比浊法测量仪内，于(37±0.5)℃培养。另取稀释溶剂1.0ml，空白培养基9.0ml，混匀，作为空白对照；再取稀释溶剂1.0ml，含菌培养基9.0ml，混匀，作为阳性对照。仪器在线于530nm波长处测定各管金葡菌对数生长期内不同培养时间下的吸光度(A)或浊度。根据量反应平行线原理［6］ 计算 供试品的效价值。 3 结果 3.1 测定条件的选择 (1)实验菌的选择由于乙酰螺旋霉素适用于革兰阳性菌如金葡菌、链球菌、肺炎杆菌、大肠埃希菌等，根据其抗菌作用与中国药典2005年版常用的效价测定用菌株，初步选择大肠埃希菌、金葡菌与肺炎克雷伯菌为实验用菌株，进行进一步的筛选。 绘制菌株在不同抗生素浓度的生长曲线(图1)，根据生长曲线及在不同抗生素浓度下菌液吸光度值的变化，发现大肠埃希菌对乙酰螺旋霉素不敏感，对不同浓度的乙酰螺旋霉素，培养后菌液吸光度值相差很小，菌株生长曲线无明显地对数生长期，不适用。乙酰螺旋霉素对肺炎克雷伯菌抑制作用较强，对不同浓度的乙酰螺旋霉素，培养后菌液吸光度值差值较小，且菌生长缓慢，也不适用。金葡菌对乙酰螺旋霉素敏感，对不同浓度的乙酰螺旋霉素，培养后菌液吸光度值差值较合适，菌株生长曲线有较好地对数生长期，可以选择。 图1 金葡菌的生长曲线 (2)实验菌浓度的选择 按含菌培养基的配制方法，加入不同体积的菌液2.0～8.0ml至培养基100ml中，结果显示菌液浓度太低时，细菌生长受抗生素抑制，生长时间达4h，吸光度值仍达不到0.2；菌液浓度太高时，吸光度值很快超过0.7，且由于培养基中含菌量太多，菌本身互相抑制，导致菌生长杂乱，偏离平行较差；最终选择菌液浓度为0.5