液质联用鉴定琥珀酸氯霉素的成分.docVIP

　　液质联用鉴定琥珀酸氯霉素的成分 【摘要】 目的 用高效液相色谱-电喷雾-质谱（HPLC/ESI-MS-MS）法 分析 琥珀酸氯霉素各组分的化学成分。 方法 采用HPLC/ESI-MS-MS法对琥珀氯霉素中的化学成分进行初步 研究 。液相色谱条件为色谱柱：Agilent C18 2.1mm×250 mm；流动相：流动相0.05M甲酸铵用甲酸调pH至4.0 /乙腈=80/20,流速0.2ml/ min,检测波长276nm；质谱条件为离子肼电喷雾质谱仪，离子源：ESI；检出模式：负离子检测。结果与结论 得到了样品MS以及选择离子对应MS/MS质谱图，鉴定出琥珀酸氯霉素中未知成分的化学结构式,为工艺开发和质量控制提供依据。 【关键词】 琥珀酸氯霉素;高效液相色谱;质谱 【Abstract】 Objective A HPLC/ESI-MS method for relative pounds of chloramphenicol succinate ethod studied on relative pounds of chloramphenicol succinate ;Column:an Agilent ODS column 250×2.1mm;Mobile phase: 0.05M ammonium formicate buffer PH4.0/acetonitrile=80/20 ,flol/min, and λ276nm;Mass:trap ion mass;source:ESI;Scan mode:negative ion scan.Results 4 pounds ethod providing useful information for study and quality control of chloramphenicol succinate. 【Key phenicol succinate；HPLC; mass-spectrum 琥珀酸氯霉素（Chloramphenicol succinate）（结构见图1）,D-苏式-（-）-N- ［α－（羟基甲基）-β-羟基－对硝基苯乙基］-2，2-二氯乙酰胺α－琥珀酸酯。由氯霉素和琥珀酸酐反应制得的氯霉素酯性化合物，在体内很快分解成氯霉素显示抗菌活性，其抗菌谱、作用、用途和不良反应与氯霉素相似。静脉注射血药浓度高，可进入脑脊液。本品排泄快。琥珀酸氯霉素相关成分的研究未见报道。本文利用RP-HPLC分离得到4个组分，并利用ESI-MS-MS技术鉴定了两个未知成分。 1 试药和仪器 1.1 试药 琥珀酸氯霉素（由海正药业提供）；乙腈，色谱纯（美国Fisher公司）；其余试剂均为分析纯。 1.2仪器 美国Agilent 1100 液相色谱仪,包括G1322A在线脱气机、G1312A二元泵、G1314A可变波长检测器、G1313A自动进样器、G1316A柱温箱。Finnigan LCQ Advantage 离子肼质谱联用仪。 2 实验方法 2.1 液相部分 Agilent 1100型液相色谱仪，色谱柱：Agilent C18 2.1mm×250mm；流动相：0.05M甲酸铵用甲酸调pH至4.0/乙腈=80/20，流速0.2ml/min，波长276nm,柱温:室温，进样方式为自动进样。 2.2 电喷雾质谱仪 离子源：ESI；检出模式：负离子形式检测；电离电压：4.5 kV；电喷雾接口干燥气（N2）流速50，辅助气流量为10,二级碰撞能量为18。 2.3 统计学处理 Finnigan Xcaliber 1.3 数据处理系统。 2.4 供试液的制备 精密称取琥珀酸氯霉素0.025g，置50ml容量瓶用流动相溶解并稀释至刻度，混匀，即得。 4 实验结果 4.1 HPLC分离 琥珀酸氯霉素的HPLC色谱图见图2，图中出现4个色谱峰，它们的保留时间分别为9.14、10.43、12.45、14.51min，其中2#峰为琥珀酸氯霉素主成分。 4.2 ESI-MS-MS确认组分 见图3。采用系统提供的ESI-MS与MS-MS功能进行质谱检测，1#峰［M-H］-分子离子峰321/323/325丰度比近似于9/6/1，表明分子中有两个-Cl元素，此峰得到的质谱信号和液相保留时间与氯霉素相同，1#峰应为氯霉素。图2 样品的色谱图图3 琥珀酸氯霉素的MS谱图 3#峰有［M-H］-分子离子峰421/423/425丰度比近似于9/6/1，分子中有两个-Cl元素，此成分应与主成分有相同的分子量，且其二级质谱碎片与主成分相同，可推断3#峰应为琥珀氯霉素异构体。 4#峰有［M-H］-分子离子峰521/523/525丰度比近似于9/6/1，分子中有两个-Cl元素，分子量比主成分多1