清肺渗湿汤对哮喘大鼠肺组织淋巴细胞上凋亡调控基因Fas-Fas.docVIP

　　清肺渗湿汤对哮喘大鼠肺组织淋巴细胞上凋亡调控基因Fas/Fas 【摘要】 目的 观察清肺渗湿汤对哮喘大鼠肺组织淋巴细胞上凋亡调控基因Fas/FasL表达的 影响 。 方法 将清洁级雄性ethods 60 rats ly divided into five groups, they a group, hexadrol group, QingfEIshenshi Decoction group and Mashingshigan decoction group. Bronchial asthma in acute episode model anner of egg albumen sensibilization and provocation. Rats in each group mune histochemistry. Results Protein expression of Fas/FaL-s in lung tissue in hexadrol group, Qingfeishenshi Decoction group and Mashingshigan decoction group oting apoptosis of local lymphocyte by potentiation of gene expression of Fas/FaL-s of modulating apoptosis portant mechanism of Qingfeishenshi Decoction, matory reaction of bronchial asthma. 　　【Key phocyte; Asthma; Apoptosis; Gene expression; Membrane glucoprotein; Biosynthesis; Disease Model; Animal “病热痰者当须渗利”是周兆山教授根据中医学“治病必求于本”思想提出的治疗支气管哮喘(热哮证)的创新性理念［1］，清肺渗湿汤是对这一理念的具体实践。清肺渗湿汤以麻杏石甘汤为基础，配合薏苡仁、茯苓、车前草、石韦等利水渗湿药，有宣肺化痰、渗湿利水之效。前期的临床 研究 已证实此方具有确切的临床效果［1］。我们通过观察清肺渗湿汤对哮喘大鼠肺组织淋巴细胞上Fas/Fas-L表达的影响，从细胞凋亡调控的角度探讨了清肺渗湿汤起效的分子生物学机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 实验动物 　　60只清洁级健康雄性L。 　　1.1.2.2 试剂 　　卵白蛋白冻干粉10 g/支(Grade II，sigma A5253)，由华美生物工程公司上海分公司分装，批号：040402，配制成10%和1%溶液，过滤消毒后置4℃冰箱保存备用。一抗：Fas兔抗鼠多克隆抗体、Fas-L鼠抗鼠单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供；二抗：非生物素检测试剂盒由北京中山生物技术有限公司提供；DAB显色剂由北京中山生物技术有限公司提供。 　　1.1.3 主要仪器 　　超声雾化器(江苏鱼跃医疗设备有限公司，标准号Q/3211812YQ007-2000)；Nikon YS100型光学显微镜；微量移液器(GILSON)；微量移液器吸头：20、200、1000 μL(GILSON)；1.5 mL微量离心管(eppendorf管，GILSON公司)；RAK-2001耐高温抗原修复盒(南京生物工程有??公司)；免疫组化孵育盒和PBS冲洗瓶(福州迈新公司)；PYX-DHS-X隔水式电热恒温培养箱(上海市跃进医疗器械厂)；Bs110型型 电子 天平(Sartorius公司)。 　　1.2 动物模型制备 　　实验大鼠随机分为5组，每组12只。分别为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、清肺渗湿汤组、麻杏石甘加味汤组。哮喘模型组和各药物干预组均于实验第1日、第8日和第15日共3 次在腹腔分2点注射10%卵白蛋白并0.9%氯化钠注射液致敏；第3次致敏1周后，每日以1%卵白蛋白并0.9%氯化钠注射液对模型组和药物干预组动物进行超声雾化吸入，诱发其哮喘发作，连续激发7日。正常对照组予0.9%氯化钠注射液代替抗原进行致敏和激发。 　　1.3 给药方法 　　5组均从激发阶段的第1日起开始给药，正常对照组和哮喘模型组均予0.9%氯化钠注射液灌胃30 g/kg；地塞米松组用地塞米松片1 mg/kg；其他2组分别予清肺渗湿汤和麻杏石甘加味汤灌胃30 g/kg。各组均连续给药7日。 　　1.4 标本的采集及免疫组化 方法 步骤 　　心脏取血后处死动物，剥离肺脏，无菌操作下切取大鼠左侧肺组织，以4%的多聚甲醛固定，常规石蜡包埋切片，HE染色，然后将石蜡切片进行脱蜡脱水、热修复、酶消化