细菌染色及涂片观察的方法.pptVIP

细菌的染色和涂片观察;第一节? 不染色标本检查法;一、不染色标本检查法的具体方法;第二节? 染色标本检查法;? 细菌染色的一般程序;1、 涂片制备：;2、 固定：;3、 媒染：;4、 染色：;5、 脱色：;6、 复染：;常用染色法;（一）、单染色法： ;（二）、复染色法： ;1、 革兰氏染色法（Gram’s Stain）;（1）、革兰氏染色的方法：;固定—→初染—→媒染—→脱色 （结晶紫或龙胆紫） （ 卢戈氏碘液） （95%酒精） —→复 染 （稀释复红）; 固定 初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP” （Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“Gˉ”或“GN”（Gram’s Negative）表示。 ;革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄色葡萄球菌 x 1000);革兰氏阳性链球菌例子;革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000);革兰氏阴性弧菌例子;革兰氏阳性产芽孢杆菌例子 ;革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特菌 x 1000);革兰氏阴性弯曲菌例子;革兰氏阳性棒状杆菌例子;革兰氏染色的结果与培养基成分、培养条件、操作技术及菌龄等有密切的关系。 培养基成分：在缺乏镁盐的培养基中，革兰氏阳性菌可变为革兰氏阴性菌。 培养条件：在酸性环境中细菌带正电荷。 操作技术：如涂片太厚影响酒精脱色，革兰氏阴性菌则可染成革兰氏阳性菌；脱色时倘酒精作用时间太长，革兰氏阳性菌又会染成革兰氏阴性菌。 菌龄：菌龄也能影响染色的结果，这和细菌生长过程中核酸含量的改变有关。例如本是革兰氏阳性的老龄菌，因核酸减少则常有许多菌细胞变为革兰氏阴性。;革兰氏阳性菌细胞壁中肽聚糖含量较多，脂类较少，与95%酒精接触后可迅速导致细胞壁脱水，通透性降低，使在细菌细胞内着色的染料——结晶紫与碘的复合物不易透出，所以保留了紫色。而革兰氏阴性菌细胞壁含肽聚糖较少、脂类较多，与95%酒精接触后肽聚糖脱水不明显，而脂类被酒精溶解后使细胞壁通透性增加，酒精易透入菌体内溶解染料——碘复合物并使其透出，因而使紫色被洗脱后又被染成红色??;3）、革兰氏染色法的临床意义;③、选择抗菌药物：GP菌和GN菌在细胞壁等结构上有很大差别，因而对抗菌药物的敏感性不同。如大多数GP菌对青霉素、红霉素、头孢菌素等敏感；而大多数GN菌对这几种抗生素不敏感，但对链霉素、氯霉素、庆大霉素、卡那霉素等敏感，故临床上可根据病原菌的革兰氏染色性，选择有效的药物进行治疗。;2、 抗酸染色法;①染色的步骤： 直接涂片法;夹层杯液基集菌法：;固定——→初染——→脱色——→复 染 石炭酸复红加热 3%盐酸酒精 吕氏美兰 ;染色过程中的细菌颜色变化：;镜检与报告：;③???? 抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风杆菌）和非抗酸菌。;（三）、特殊结构染色法;在细菌检验工作中，除异染颗粒染色法较常用外，由于其它特殊结构染色法操作费时，费用较高、染色过程要求非常严格，而普通染色法虽不能使特殊结构本身着色，但菌体着色后，荚膜和芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊染色法比较复杂，故日常工作中较少使用这些特殊结构染色法;（四）、负染色法;;（五）、荧光染色法