短程免疫法制备抗血清效果比较.docVIP

　　短程免疫法制备抗血清效果比较 【摘要】 探讨快速制备抗血清的 方法 和效果,以适应其在实验教学中的需要。方法 采用短程免疫法，对家兔分组，用大肠杆菌抗原菌液、绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原小剂量连续多次接种后，收集抗血清，对其效价进行测定,并与传统抗血清制备方法进行比较。结果 经大肠杆菌抗原、绵羊红细胞(SRBC)抗原和鸡蛋黄抗原免疫后的抗血清最终分别达到1∶10240、1∶1200和1∶10240的高效价。结论 此方案制备抗血清所用时间短，效价高，亲和力强，适用于实验教学。 【关键词】 抗血清 短程免疫 标本制备 免疫学试验 效价 Abstract:Objective: To explore the methods of producing immune serum and its effect on short-term immunization, in order to meet its experimental teaching needs. Methods: By the means of short-term immunization, rabbits munized es all dose, then the serum preparation methods. Reslults: The titer of antiserum from E. coli antigen, Sheep red blood cells antigen and yolk antigen reached high up to 1:10240 ,1:1200 and 1:10240 separately . Conclusion: The antiserum prepared by shortterm immunization has high-titer and high-affinity, is applicable to experimental teaching. Key ; shortterm immunization; preparation of samples; immunological tests; titer 抗血清是经过抗原免疫的动物血清，含有特异性免疫球蛋白(Ig)，可直接 应用 于病原体的诊断或感染性疾病的紧急预防和 治疗 ，也可通过进一步纯化血清中的Ig，用于多种疾病的诊断和治疗，是一种非常重要的生物制品。鉴于抗血清在临床免疫学检验中的广泛应用，如何制备抗血清成为学生必需具备的实验技术。在以往的抗血清制备实验课中,制备高效价抗血清基本采用大剂量长程免疫法，该方法具有产物效价高、亲和力强的优点，但耗时过长，给 研究 造成一定的 影响 。为了探索快速制备抗血清的新方法 ,本研究选取大肠杆菌抗原和绵羊红细胞(SRBC)抗原代表颗粒性抗原，选取鸡蛋黄抗原代表可溶性抗原［1］,采用小剂量短程免疫法制备抗血清 ,以探讨该方法的可行性。 1 材料与方法 1.1 试剂与器材 1.1.1 抗原 大肠杆菌（泰山医学院临床微生物学教研室保存）；绵羊红细胞(SRBC)；新鲜鸡蛋。 1.1.2 实验动物 健康家兔32只，雄性，体重2.0～2.5 kg，无免疫史，由泰山医学院实验动物中心提供，随机分成4组。 1.1.3 器材与试剂 紫外分光光度计；摇床恒温水浴箱；离心机；振荡器；灭菌大试管；LB液体培养基或肉汤培养基；麦氏比浊管；0.5%石炭酸溶液；磷酸盐缓冲液；盐酸溶液；HRPAb等。实验用材料均需灭菌处理。 1.2 抗原的制备 1.2.1 大肠杆菌抗原的制备 将大肠杆菌接种到营养琼脂培养皿上，37 ℃培养18～24 h，取单菌落接种于LB液体培养基或肉汤培养基中，37℃培养18～24 h，按照1%的比例转种于LB液体培养基或肉汤培养基中，37 ℃培养18～24 h，收集培养液。沸水浴1 h后3000 r/min离心10 min，弃去上清。麦氏比浊法，用石炭酸生理盐水稀释至109个/ml，取少许做无菌实验，其余菌悬液放冰箱保存。 1.2.2 SRBC抗原的制备 无菌抗凝绵羊血2000 r/min离心5 min，吸去上清，加入等量无菌生理盐水混匀，2000 r/min离心5 min，吸去上清，如此连续洗3次，最后一次可离心10 min以使红细胞密集管底，直至上清液透明无色再吸去上清液，留密集红细胞备用。用无菌生理盐水将红细胞配成20 %SRBC悬液，即为试验用的SRBC悬液。 1.2.3 鸡蛋黄抗原的制备 取新鲜鸡蛋一个，用75 %酒精消毒，在无菌条件下，于气室一端击一小孔，用无菌吸管将蛋清吸出后，将蛋黄倒入一装有玻璃珠的无菌锥形瓶内摇匀，用生理盐水进行1∶5稀释，置4 ℃冰箱保存备用。