石菖蒲中总氨基酸的含量测定.docVIP

　　石菖蒲中总氨基酸的含量测定 【摘要】 目的建立了内蒙古石菖蒲中总氨基酸的含量测定方法。方法采用分光光度法。结果标准曲线方程A=0.001 1C-0.019 9 (r=0.999 3)，平均回收率为97.10%，RSD为0.95%(n=6)。该法测得石菖蒲中总氨基酸的含量为0.62%，与氨基酸自动分析仪所测得的石菖蒲中总氨基酸的含量一致。结论该方法灵敏、简便、快速、准确可靠。 【关键词】 石菖蒲; 总氨基酸; 分光光度法 Abstract：ObjectiveTo establish a method for determination of total amino acid in A.tatarinoetry ethod is simple,rapid and reliable. Key ino acid; Spectrophotometry 石菖蒲系天南星科（Araceae）菖蒲属（Acorus）石菖蒲A.tatarinol,分别置25 ml量瓶中,加水稀释到刻度,摇匀,精密量取上述两种溶液及对照品溶液2.0 ml,分别置25 ml量瓶中,照含量测定法,自“加水4.0 ml”起,制备供试品,在紫外可见分光光度计上扫描。结果,样品与对照品均在570 nm处有最大吸收,而阴性对照无干扰,故选择本品的检测波长为570 nm。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取105℃干燥至恒重的L-精氨酸对照品5.015 mg,置50 ml容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每毫升含精氨酸100.3 μg)。 2.3 标准曲线的制备 分别精密吸取精氨酸标准液0.0, 1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 ml,置25 ml量瓶中,分别加入水6.0,5.0, 4.0,3.0,2.0,1.0,0.0 ml,各加磷酸盐缓冲液(pH8.0)0.5 ml,再加2%茚三酮乙醇溶液0.5 ml,摇匀,置水浴中加热15 min,取出,放冷,分别加入蒸馏水至刻度,摇匀,以第1份为空白,采用分光光度法［4］，在570 nm波长处测定吸收度。以对照品加入量为横坐标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线（见图1）。经回归统计,得标准曲线方程：A=0.001 1 C-0.019 9,r=0.999 3表明精氨酸浓度在1.003～6.018 μg范围内与吸收度呈良好的线性关系。 2.4 样品溶液的制备 取石菖蒲药材饮片5 g，加水50 ml，煎煮两次，1 h/次，煎煮液过滤后，调pH至4,通过732型强酸性H型阳离子交换树脂柱,用蒸馏水洗至中性,再用2 mol/L氨水缓慢洗脱,直至洗脱液不显茚三酮反应,收集洗脱液,浓缩，低温蒸干，得干膏38.93 mg。精密称取干膏约20 mg,蒸馏水定容于25 ml量瓶，备用。 2.5 精密度实验 精密量取样品溶液5.0 ml,照含量测定法,制备供试品,连续测定5次,结果RSD=0.81%,表明本方法的精密度良好。 2.6 稳定性实验 精密量取本品5.0 ml,照含量测定法,制备供试品,分别于0,15,30,45,60,90 min测定,结果RSD=0.93%,表明本品供试品溶液在1.5 h内稳定性良好。 2.7 重复性实验 取石菖蒲药材饮片5 g，照样品溶液的制备方法，重复制备5份样品,照含量测定法，分别进行测定,结果RSD=0.46%,表明本方法的重复性良好。 2.8 加样回收实验 精密称取已知含量的石菖蒲药材饮片2.5 g,置50 ml量瓶中，分别加入L-精氨酸对照品约15 mg, 照样品溶液的制备方法，重复制备6份样品,照含量测定法，分别进行测定, 计算 回收率，结果表明，L-精氨酸的加样回收率为97.10%，RSD为0.95%，结果见表1,表明本法具有良好的回收率。 　 　3 结果与分析 3.1 样品含量测定 取本品精密量取样品液5.0 ml,置25 ml量瓶中,加水稀释到刻度,摇匀,精密量取2.0 ml,置25 ml量瓶中,加水4.0 ml,磷酸盐缓冲液(pH 8.0)0.5 ml,再加2%茚三酮乙醇溶液0.5 ml,摇匀,置水浴中加热15 min,取出,放冷,加蒸馏水至刻度,摇匀,在570 nm波长处测定吸收度,随行空白,从标准曲线上读出供试品溶液中总氨基酸的重量, 计算 ,即得样品的测定结果见表2。表1 样品加样回收实验结果 表2 石菖蒲中总氨基酸含量测定结果 3.2 酸度的影响 在用强酸型阳离子交换树脂富集石菖蒲中氨基酸时，将药材提取液分别用2 mol/L盐酸调pH2，4，5，6后，再分别过阳离子交换树脂柱，结果表明：药材提取液调pH至4时，树脂对氨基酸的吸附最完全。 3.3 上样流速的影响 在用强酸型阳离子交换树脂富集石菖蒲中氨基酸时，当上样流速为1 ml/mi