高考生物总复习 考点1 基因工程的理论基础及操作工具(5年19考)新人教版.docVIP

考点1　基因工程的理论基础及操作工具(5年19考)　 (2013全国大纲卷、广东理综……) 1．基因工程的概念 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境 生物体外 操作对象 基因 操作水平 DNA分子水平 基本过程 剪切→拼接→导入→表达 结果 人类需要的基因产物或生物类型 优点 可定向改造生物的遗传性状 2.基因工程的基本工具 (1) (2)DNA连接酶 常用类型 E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 大肠杆菌 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接黏性末端或平末端 结果 都缝合磷酸二酯键，如图 (3)基因进入受体细胞的载体 ①类型 ②对载体的分析 条件 目的 稳定并能复制 目的基因稳定存在且数量可扩大 有一个至多个限制酶 切割位点 可携带多个或多种外源基因 具有特殊的标记基因 便于重组DNA的鉴定和选择 易错提醒 (1)限制酶切割位点所处的位置必须是在所需的标记基因之外，这样才能保证标记基因的完整性，有利于对目的基因的检测。 (2)常见的标记基因有抗生素基因、产生特定颜色的表达产物的基因和荧光基因等。 (3)不同限制酶切出的黏性末端未必不同，如G↓GATCC和↓GATC识别的序列不同，但处理后形成的黏性末端相同。 思考感悟 限制酶为何不切割其所在生物自身的DNA? 提示　限制酶不切割原核生物自身DNA的原因：原核生物DNA序列中不存在该酶的识别位点或识别序列已经被修饰。 　基因工程的理论基础及操作工具 1．(2012·全国新课标，40)根据基因工程的有关知识，回答下列问题： (1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATT C……G G……CTTAA 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoRⅠ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是____________________。 (3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。 (4)反转录作用的模板是________，产物是 若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。 (5)基因工程中除质粒外，________和________也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是_______________________________________________________。 答案　(1)平末端　黏性末端　(2)切割产生的DNA片段末端与EcoRⅠ切割产生的相同　(3)T4　E·coli　(4)mRNA(或RNA)　cDNA(或DNA)　PCR(聚合酶链式反应)　(5)动植物病毒　λ噬菌体的衍生物　(6)未处理的大肠杆菌吸收质粒(外源DNA)的能力极弱 　基因工程中限制酶的选择问题 2．(江苏卷，2T)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ Hind Ⅲ EcoRⅠ SmaⅠ 识别序列及 切割位点 ↓ GGATCC CCTAGG ↑ ↓ AAGCTT TTCGAA ↑ ↓ GAATTC CTTAAG ↑ ↓ CCCGGG GGGCCC ↑ (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有________个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越________。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用Sma Ⅰ切割，原因是________________________________________________________________________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamH Ⅰ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 ________________________________________________________________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了________。 (7)为了从cDNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在________的培养基中培养，以完成目的基因表达的初步检测。 解析　本题综合考查基因工程的过程及应用。(1)质粒是双链环状DN