碱性成纤维细胞生长因子在鼠缺血心肌中表达及其促血管新生作用.docVIP

　　碱性成纤维细胞生长因子在鼠缺血心肌中表达及其促血管新生作用 作者：盛娓娓 黄晶 周大燕 李文章 【摘要】 目的 探讨腺病毒穿梭质粒介导的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因质粒在大鼠缺血心肌中的表达情况及其对缺血心肌血管新生、梗死面积的影响。方法 42只健康SD大鼠接受冠状动脉左前降支结扎术，存活30只，随后随机分为 治疗 组(n=15)和对照组(n=15)，治疗组于心肌梗死区和正常区交界处局部注射100 μl bFGF基因(1 μg/μl)，对照组以等体积生理盐水处理。4 RNA表达水平较对照组明显增高〔1.238±0.323 vs 0.771±0.102(Plt;0.05)〕,仅在治疗组检测到bFGF 蛋白表达。②治疗组微血管密度明显高于对照组〔141.13±17.65 vs 75.58±6.59/视野(Plt;0.05)〕;治疗组梗死面积小于对照组〔16.32±0.43 vs 17.00±0.57%(Plt;0.05)〕。结论 重组bFGF裸质粒经心肌内直接注射后能有效表达并发挥促进梗死后心肌血管新生和缩小梗死面积的作用。 【关键词】 基因转染;心肌梗死;血管新生 　　【Abstract】 Objective To investigate the expression of basic fibrolast groediated by adenovirus shuttle plasmid in ischemic myocardium and observe the impact on angiogenesis and myocardial infarct area. Methods The anterior descending coronary artery ake acute myocardial infarction models. 42 health SD rats accepted operation and 30 rats survived. The survival rats ent group (n=15) randomly. A volume of 100 μl (1 μg/μl) pAdTracebFGF or physiological saline icroscope. The expression of bFGF gene chloride to delineate myocardial infarct area. Results After 4 als RNA ent group (1.238±0.323 vs 0.771±0.102, Plt;0.05), the expression of bFGF protEin could detected only in the treatment group. pared to the control group, the capillary density ent group (141.13±17.65 vs 75.58±6.59, Plt;0.05). The myocardial infarction area of the treatment group aller than the control group 〔(16.32±0.43)% vs (17.00±0.57)%, Plt;0.05〕. Conclusions bFGF gene mediated by adenovirus shuttle plasmid can be efficiently transferred into rat ischemic heart and then stimulate angiogenesis and minimize myocardial infarct area. 　　【Key a);兔抗人bFGF(Santa Cruz)，鼠βactin内参抗体(嘉美);辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG、山羊抗大鼠IgG(Chemi);二辛可宁酸(BCA)蛋白定量试剂盒(博麦德); 逆转录 cDNA合成试剂盒(fermatas)。 　　1.3 重组bFGF质粒的构建、扩增及鉴定 表达24 kD蛋白质的bFGF 基因编码区通过PCR扩增后亚克隆至pAdTraceTO4，酶切位点为BamHⅠ和SalⅠ(本部分由美国芝加哥大学医学中心构建)。将连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆进行质粒扩增抽提，通过EcorⅠ酶切鉴定和基因测序证明pAdTracebFGF质粒构建成功。见图1。 　　图1 pAdTracebFGF基因测序部分片段 　　1.4 鼠急性心肌梗死模型建立和心肌内注射 随机选取大鼠，称重，麻醉完全后将动物平卧固