第七章目的基因的表达.ppt

（一）宿主细胞的选择 （1）容易获得较高浓度的细胞； （2）能利用易得廉价原料； （3）不致病、不产生内毒素 （4）发热量低、需氧低、适当的发酵温度和细胞形态； （5）容易进行代谢调控； （6）容易进行DNA重组技术操作； （7）产物的产量、产率高， （8）产物容易提取纯化。 分泌能力强，蛋白质不形成包含体。产物蛋白质不能糖基化。有很强的胞外蛋白酶对产物降解。 没有色氨酸时，阻遏蛋白不能与操纵基因结合，能转录合成色氨酸所需要的酶。 所有带后缀a 的载体从GGA三联密码子开始表达，带b 的从GAT 开始，带c 的从BamH I 识别序列ATC三联密码子开始。带d 后缀的载体阅读框和带c 的一样，不同的是它们有一个上游Nco I 克隆位点而非Nde I 位点以便直接将目的基因克隆到AUG起始密码子。 2. 高等植物的基因转移系统 花粉管导入法的特点是直接、简便。它的受体材料为植株整体，省略了细胞组织培养的诱导和传代过程，排除了植株再生的障碍，特别适合于难以建立有效再生系统的植物。由于转化的是完整植株的卵细胞、受精卵或早期胚胎细胞，导入的DNA分子整合效率较高。 3.高等植物的基因表达系统 4.植物转基因技术在植物品种改良中的应用 植物细胞中的乙烯由S-腺苷甲硫氨酸经氨基环丙烷羧酸合成酶ACC和乙烯合成酶EFE催化裂解而成。 科学家采用反义RNA技术封闭番茄细胞中上述两个酶编码基因的表达，由此构建出的重组番茄的乙烯合成量分别仅为野生植物的3%和0.5%，明显增长了番茄的保存期。 用于构建抗虫害转基因植物常见的外源基因有苏云金芽孢杆菌的毒晶蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因、淀粉酶抑制剂基因、凝集素基因、脂肪氧化酶基因、几丁质酶基因、蝎毒素、蜘蛛毒素基因等40多个，其中毒晶蛋白基因、蛋白酶抑制剂基因和凝集素基因应用最为广泛。 抗除草剂的水稻 为达到此目的至少有两种战略可供选择： 一是高效表达能提高植物胞内渗透压的同源或异源蛋白； 二是借助于蛋白质工程技术改变植物细胞内丰度较高的蛋白质的氨基酸组成，如在不影响蛋白质结构与功能的前提下适当提高脯氨酸残基的含量等。 为了增加稻米中的铁质含量，从大豆芽中分离出铁蛋白编码基因，将之转入亚洲稻谷一个普通品系中。结果发现，转基因稻谷能储存相当于普通稻谷3倍的铁质； 研究还发现，普通稻米中含有一种植物酸，阻碍人的消化系统对铁的吸收。瑞士科学家将来自水仙等植物的相关基因植入水稻中，不仅铁的含量有所提高，而且维生素A的含量也丰富了。 苯基苯乙烯酮合成酶（CHS）是黄酮类色素的生物合成途径中的关键酶。 利用反义RNA技术可有效抑制矮牵牛花属植物细胞内的CHS基因表达，使转基因植物花冠的颜色由野生型的紫红色变成了白色，并且对CHS基因表达抑制程度的差异还可产生一系列中间类型的花色。 分子生物学和遗传学的研究都表明，同源异形基因表达的加强或减弱都会改变花的大小和形状，而这些基因的表达时间直接影响到植物的花期。同源异形基因控制花形的过程十分保守，在几乎所有的观赏花卉中都是一样的，这就为人们用基因工程的方法改变花形和花期提供了有利条件。 3.利用转基因植物生产功能蛋白和工业原料 美国VPI研究机构的专家将克隆的hGC基因经改造导入到烟草中，并获得高效表达。在每克这种转基因烟草的新鲜叶片中，hGC的含量竟高达1mg，也就是说，从一株转基因烟草中就能产生出传统工艺需要消耗数千只胎盘才能获得的药物。 在饲料中添加植酸酶则可以提高动物对植酸磷元素的利用率，减少动物粪便中磷酸盐含量，改善畜牧业发达地区磷酸盐富集化污染的程度。 荷兰科学家从黑曲霉菌中克隆到植酸酶基因，并将之导入到烟草的种子中表达。在饲料中添加这种转基因烟草的种子便可达到良好的效果。 此外，鉴于油菜植物易生长且产量高的特点，人们还致力于用它来生产其它工业用油，如可作润滑油和尼龙生产原料的芥酸以及用于麦淇淋制作的6-十八碳烯酸等。 （6）改变花卉形状和颜色的转基因植物 花卉的颜色是由花冠中的色素成分决定的。大多数花卉的色素为黄酮类物质，由苯丙氨酸通过一系列的酶促反应合成，而颜色主要取决于色素分子侧链取代基团的性质和结构，如花青素衍生物呈红色，翠雀素衍生物呈蓝色等。 改变花卉的颜色 （6）改变花卉形状和颜色的转基因植物 改变花卉的颜色 （6）改变花卉形状和颜色的转基因植物 植物激素在控制花朵的形状和大小方面起着重要的作用。例如，细胞分裂素与植物生长素的比值可以决定植株及花的形状。 改变花卉的形状 （6）改变花卉形状和颜色的转基因植物 改变花卉的形状 1.利用植物生物反应器生产医用蛋白 2.利用植物生物反应器生产食品或饲料添加剂 3.利用植物生