纳米纤维凝胶支架对烧伤创面美学修复的作用.docVIP

　　纳米纤维凝胶支架对烧伤创面美学修复的作用 　　[摘要] 目的:探讨自组装短肽纳米纤维凝胶支架可能的创伤修复机制并验证`其修复效果。方法:以短肽纳米纤维为修复原料,利用深Ⅱ度和Ⅲ度皮肤烧伤动物模型,验证生物材料对烧伤创面的影响。结果:RADA16 -Ⅰ处理组烧伤创面及其周围正常组织的毛发生长旺盛(Plt;0.05),在烧伤后急性修复期(24 h)创面根部毛囊和腺体中角蛋白19强表达。结论:自组装短肽纳米纤维凝胶支架对深度烧伤皮肤创面毛发等附属器官有保护及促进作用。 　　[关键词] 烧伤;美学修复;纳米纤维 　　[Abstract] Objective: To explore the effect of peptide RADA16-I on aesthetic repair of burn eans of RADA16-Ⅰdressing utilizing deep Ⅱ degree and Ⅲ degree skin burn odels. Results: The hairs of burn al organization ore vigorous by means of RADA16-Ⅰpared aterials. 　　[Key l/kg体重)给予麻醉。注射后,动物转移到温暖的环境中以保持动物的体温。刮去SD大鼠背部的毛发,75%的医用酒精消毒。应用温控 电子 金属探头[3],脊柱两侧使两个对称部位制造直径lt;3.0 cm的烫伤创面。伤口边缘清晰。深Ⅱ度烧伤温控在90℃,持续时间为8 s,Ⅲ度烧伤创面18 s 94℃。每个深Ⅱ度烧伤创面给予50 μl短肽,Ⅲ度烧伤创面100 μl。每个伤口上覆盖一层薄薄的凡士林纱布。伤口开始在1个星期后结痂。 　　1.3实验分组 　　12只SD大鼠用于Ⅲ度烧伤创面模型,分为RADA16-Ⅰ组,壳聚糖组,胶原蛋白组,每组4只,分别以RADA16-Ⅰ,壳聚糖和胶原蛋白处理,并与空白对照组(4只)对比。观察指标是烧伤皮肤表皮干细胞表面标志角蛋白19的表达。实验方法是免疫荧光组织化学病理染色,观测时间是伤后24 h、4 d、7 d。4组大鼠8个创面随机分别用1%RADA16-Ⅰ 治疗 ,壳聚糖组和胶原蛋白组与空白对照组对比。采用HE染色。观察时间:烧伤后30、60和70 d。 　　1.4伤口愈合的形态学研究 　　成形后的伤口,伤口的照片和采取的大体形态观察伤口,包括每天的头发烧伤创面及其周围的增长。 　　1.5组织学检查 　　在烧伤后30、60、70和80 d,切取烧伤创面皮肤,并将其周围正常皮肤组织进行病理组织学检查。然后,所有样本分别固定在4%中性甲醛,酒精系列脱水,石蜡包埋。切取5 μm厚的连续切片进行HE染色。 　　1.6免疫荧光组织化学染色 　　5 μm厚的大鼠皮肤冰冻切片,空气中干燥30 min。以免疫荧光分析法检测反应伤口,伤口周围的皮肤与正常皮肤表皮干细胞表面标志角蛋白19的表达。5%牛血清清蛋白中4℃孵育3 h去除非特异性结合蛋白(过氧化物酶标记链霉亲和素,购买自北京中山金桥生物技术有限责任公司)。孵育的切片滴加抗体。初级抗体(小鼠单克隆抗角蛋白#19,1∶100稀释,从美国Inc.TM购得)。标本在4℃ 12 h下,在二级抗体rhodammine(TRITC)罗丹明荧光探针标记的纯羊抗鼠IgG(ZSGB生物北京)抗体,1 h避光4℃保存。然后切片滴加DAPI[6二眯基 - 2 -苯基吲哚盐酸盐水合物,购自Sigma(D-9542),1∶500]。阴性对照组,一抗用PBS代替。Olympus- X71-倒置莱卡DMRB免疫荧光显微镜观测,并显微摄影。短肽及空白实验组的皮肤样本,并在每组3个部分皮肤样本中选择视野,放大倍数是200 ×,随机选择6个视野。荧光共聚焦显微镜观测样本中收集到的序列图像,使用图像分析软件Image Pro Plus 5.0合成总体光密度值。 　　1.7 统计学分析 　　所有的定量数据显示为均值±标准差(x±s)。使用独立样本t检验,可信区间为95%。组间比较采用单因素方差分析(ANOVA),其次是Turkey,正态分布式数据采用posthoc测试。 　　2结果 　　2.1毛囊生长 　　研究人员以病理染色方法观察烧伤创面的毛发生长。该观测时间分别为烧伤后30、60、70和80 d。与壳聚糖组,胶原蛋白组和空白对照组比较,RADA16-Ⅰ处理组烧伤创面及其周围正常组织的毛发生长旺盛(Plt;0.05,图1)。 　　2.2角蛋白19的表达 　　RADA16-Ⅰ 治疗 组荧光染色结果显示,在烧伤后急性修复期(24 h)创面根部毛囊和腺体中角蛋白19强表达,在胶原组呈弱表达,空白对照组和壳聚糖组几乎没有