络气郁滞证大鼠动物模型的建立和评价.docVIP

　　络气郁滞证大鼠动物模型的建立和评价 作者：吴相春，来静，吴以岭，贾振华，王洪涛，张秋艳 【摘要】 目的建立络气郁滞证大鼠动物模型并进行评价。方法对大鼠慢性束缚6周建立络气郁滞证模型，观察模型大鼠的精神、饮食量、体质量、蔗糖水摄取量，血清皮质酮(CORT)、血浆内皮素(ET)，血清5羟色胺(5-HT)、NO以及主动脉组织内皮细胞超微结构的变化。结果络气郁滞证模型表现为精神萎靡，反应迟钝，摄食量减少，体质量增长缓慢，蔗糖水摄取量、摄食量及体重均明显低于对照组(Plt;0.05或Plt;0.01);模型组大鼠血浆ET升高、血清CORT升高，5-HT、NO降低(Plt;0.05或Plt;0.01);内皮细胞超微结构发生明显改变。结论利用慢性束缚法6周，通过观测大鼠体质量、摄食量、蔗糖水摄取量、CORT、ET、NO、5-HT的变化，初步建立络气郁滞证大鼠动物模型，制作方法简单，评价指标客观，为脉络血管系统病的研究提供良好的实验基础。 【关键词】 络气郁滞证; 动物模型 　　Abstract：ObjectiveTo establish and evaluate the rat animal model al model icrostructure change of aorta ission electron microscope. ResultsThe animal model rats shoentia, dull,no appetite，increasing sloicrostructure of aorta changed obviously.ConclusionThe animal model ethod has been succeed through observation the changes of body icrostructure of aorta. The method is easy and the evaluated indexes are objective, ent foundation for the study of vessel-collateral and vascular system disorders. 　　Key al model 　　络气郁滞、络气虚滞引起的络脉自稳状态功能异常与血管内皮功能障碍具有内在一致性，均为“脉络-血管系统病”的始动因素并贯穿病变全过程，成为运用络病理论研究血管病变的切入点[1]。高同型半胱氨酸血症是内皮功能障碍的独立危险因素，而应激是引起高同型半胱氨酸血症的主要原因。我们以慢性束缚法建立络气郁滞证大鼠动物模型，进行络气郁滞证候的研究。 　 　1 材料与仪器 　　1.1 动物及分组健康雄性，筒口外径7 cm，内径5 cm，筒内前端置一直径小于筒的内径，并可以前后调节的圆嘴的塑料口，其口为通气口，后端为开关闸门。尾悬挂架由大鼠实验架改装而成。 　 　2 方法 　　2.1 动物造模方法络气郁滞模型组：参照吴淑庆等[4，5]的方法，实验开始时即给予束缚法，将大鼠放入束缚盒内，调节前端活动部位到合适的位置，使大鼠不产生强烈反抗的紧张程度。每天 6 h(9:00～15:00)，连续6周。 　　2.2 观察指标 　　2.2.1 行为学观察 ①一般情况的监测：称每日摄食量，最后 计算 总摄食量;每周记录体质量1次;观察模型动物精神、活动情况等。 ②尾悬挂：参照唐已婷等[3]的方法，于实验末测定不动时间、挣扎次数。③1%蔗糖水摄取量测定：参照熊振芳等[6]、金光亮等[7]的方法，在实验前先对所有的大鼠进行1%蔗糖水摄取训练，即先用蔗糖水喂养48 h，随后断水24 h，再于晨8～9时的1 h内测量每只大鼠摄取蔗糖水的量，以此作为每只大鼠蔗糖水摄取量的基线，在实验末于晨8～9时测1h内的蔗糖水摄取量。 　　2.2.2 内皮功能的检测采用硝酸还原酶法检测血清NO含量，试剂盒由南京建成生物试剂公司提供。放免法检测血浆ET含量，试剂盒由北京普尔伟业生物科技有限公司提供。 　　2.2.3 神经递质的测定放免法测定皮质酮(CORT)，试剂盒由北京北方生物技术研究所提供;酶法测定五羟色胺(5-HT)，试剂盒由RapidBio Lab. California USA提供。 　　2.2.4 循环酶法测定血清同型半胱氨酸(HCY)试剂盒由北京九强生物技术有限公司提供。 　　2.2.5 主动脉组织内皮细胞超微结构实验结束后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉，颈总动脉取血后，仔细分离并截取一小段胸主动脉，迅速浸入电镜液中，修成1 mm×1 mm×1 mm大小组织块，置4%戊二醛固定液中4℃保存(由河北医科大学基础医学院电镜室协助完成)。 　　2.3 统计学处理所有数据用±s表示。采用SP