芪蛭益肺颗粒对COPD大鼠模型SPA表达和超微结构的影响.docVIP

　　芪蛭益肺颗粒对COPD大鼠模型SPA表达和超微结构的影响 作者：李金田 张莉 刘永琦 李娟 张毅 魏舒 【摘要】 目的 探讨芪蛭益肺颗粒对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型肺表面活性物质相关蛋白A(SPA)表达及肺组织超微结构的影响。方法 运用气管内滴注脂多糖加烟熏28 d法建立COPD大鼠模型，免疫组化法检测SPA表达及透射电镜观察肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构变化。结果 与空白组比较，模型组大鼠SPA表达明显减少，有显著差异(Plt;0.01)，肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构不完整;与模型组比较，芪蛭益肺颗粒 治疗 组大鼠SPA表达明显增强，差异显著(Plt;0.01)，肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构完整。结论 芪蛭益肺颗粒可显著提高模型大鼠SPA表达，改善细胞超微结构，对COPD的发生起到预防保护作用。 【关键词】 芪蛭益肺颗粒;COPD;SPA;超微结构 慢性阻塞性肺疾病(COPD)是一种具有气流阻塞特征的慢性支气管炎和﹙或)肺气肿 ，气流受限不完全可逆，呈进行性 发展 ，与肺部对香烟烟雾等有害气体或有害颗粒的异常炎症反应有关〔1〕。据世界卫生组织预计，至2020年COPD将成为世界疾病 经济 负担的第五位〔2〕。在我国，在老年人易患疾病中，慢性支气管炎与肺气肿居第三位，而病死率为第一位〔3〕，对老年人健康生命的威胁越来越严重，因此COPD的预防和治疗已成为国内外学者研究的热点问题之一。本课题通过实验研究观察了纯中药制剂芪蛭益肺颗粒对COPD的疗效及其对肺组织表面活性物质相关蛋白(SPA)表达和超微结构的影响作用，为其在COPD临床治疗中的广泛应用提供理论依据。 　 　1 材料与方法 　　1.1 动物 选取SPF级健康iE显微图像处理软件一套﹙成都泰盟科技有限公司﹚;ES1000E型 电子 称一台﹙长沙湘平科技发展有限公司﹚;JEM1230型透射电镜一台﹙日本JEOL﹚。 　　1.4 动物分组及模型制备 大鼠常规饲养1 g/100 g)，第2～13天，第15～28天，每日上午在容积为48 L玻璃密闭箱内持续熏兰州牌香烟雾30 min，每天1次，1支/只。每次熏烟后，将大鼠置于鼠笼内常规饲养。 　　1.5 给药方法 第15天空白组等体积生理盐水﹙2 ml/只)灌胃，阳性药物对照组给予固本咳喘片药液(0.324 g/kg)灌胃，芪蛭益肺颗粒大剂量(3.6 g/kg)、中剂量(1.8 g/kg)、小剂量治疗组(0.9 g/kg)均给予芪蛭益肺颗粒药液灌胃治疗。每日上午 1 次，干预治疗28 d，即大鼠共饲养42 d。 　　1.6 标本采集及检测 　　1.6.1 大鼠一般状态观察 观察各组大鼠一般状态﹙活动度、精神状态、皮毛光泽度、饮食情况、体重增幅﹚及大鼠咳嗽、气喘、鼻及呼吸道分泌物等症状并做记录。 　　1.6.2 各组大鼠肺组织SPA表达检测 各组大鼠用20%乌拉坦溶液1.0 g/kg腹腔内注射麻醉，取右肺下叶，置于10%中性甲醛固定液内固定48 h，常规石蜡包埋、切片,应用免疫组化法检测SPA表达，每张切片在同一放大倍数下随机选取3个视野，计数平均肺泡阳性细胞数(个∕肺泡)。 　　1.6.3 超微结构观察 取各组大鼠左肺下叶由脏层胸膜表面指向肺门方向的肺组织，切取截面约2 mm×1 mm肺组织条，放置在滴有戊二醛的硬纸板上，然后再从各条块切取大约1 mm×1 mm×1 mm大小的肺组织块，经预冷的2.5%戊二醛于4℃环境下固定24 h，再用1%锇酸后固定1 h，梯度乙醇和丙酮脱水，EPon812包埋，制成超薄切片，醋酸铀枸橼酸铅双重染色后，透射电镜观察。 　　1.7 统计学处理 采用SPSS11.5统计软件处理，实验数据以x±s表示，采用单因素方差分析。 　 　2 结 果 　　2.1 大鼠一般状态观察 空白组大鼠生长、进食及精神状态良好，反应灵敏，皮毛光泽，体肥。模型组大鼠进食量及活动明显减少，精神倦怠，皮毛稀疏无光泽，黄涩，体瘦，呼吸急促且均出现呼吸道分泌物增加、咳喘、流涎等症状，给药后，阳性药物对照组及芪蛭益肺颗粒 治疗 组大鼠较模型组大鼠进食及生长好，体重渐增，毛色无明显变化，无咳喘症状出现。 　　2.2 各组大鼠肺组织SPA的表达 空白组：肺泡破坏程度轻，肺泡结构完整，SPA表达多。模型组：肺泡破坏程度严重，肺泡结构不完整，SPA表达明显减少。阳性药物对照组：肺泡结构较完整，SPA表达较模型组多。芪蛭益肺颗粒大剂量治疗组：肺泡破坏程度明显减轻，SPA表达显著增强。芪蛭益肺颗粒中剂量治疗组：SPA表达较模型组增强，但不及大剂量组。芪蛭益肺颗粒小剂量治疗组：SPA表达接近模型组。见表1。 　　2.3 超微结构观察 空白组：大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞胞浆内有大量板层体和线粒