p73基因多态性及蛋白表达与结直肠肿瘤关系的研究.docVIP

　　p73基因多态性及蛋白表达与结直肠肿瘤关系的研究 【摘要】 　　目的 探讨p73基因的多态性及蛋白表达与结直肠肿瘤发生风险的关系。 方法 血液标本分为3组，包括结直肠腺癌组、结肠腺瘤组、结肠未见明显异常组，各60例。采用PCRRFLP方法检测血液标本p73基因多态性。组织标本分3组，分别取自结直肠腺癌病灶处、结肠腺瘤病灶处、结直肠腺癌患者的相应远离癌灶的正常黏膜组织，各30例，采用免疫组织化学方法检测肿瘤组织中p73蛋白表达情况。 结果 （1）p73基因多态性与结直肠腺癌、腺瘤的发生有相关性，且AT/AT基因型的人群易患结肠肿瘤。（2）p73蛋白表达与结直肠腺癌的发生、 发展 有相关性。 结论 p73基因多态性与结直肠癌的发生有相关性，且AT/AT基因型的人群易患结肠肿瘤。p73蛋白表达的增加或上调与结直肠癌相关。 【关键词】 结直肠肿瘤； 基因，肿瘤抑制； 肿瘤抑制蛋白质类； 多态现象，遗传 　　结直肠癌的发生是黏膜上皮受到遗传和环境等多种因素作用、导致多基因改变及相互作用的结果。已知p53基因是人类肿瘤中的重要抑癌基因，而p73基因作为p53家族的成员，在人类肿瘤中也起着重要作用。现已确定TAp73与p53类似，也能诱导不可逆的细胞周期停滞、促进细胞凋亡，并且此功能与TAp73激活p53靶基因如Bax、p2l L，用EDTA抗凝，基因组DNA提取试剂盒（TaKaRa D9081）进行基因组DNA提取，聚合酶链反应限制性片段长度多态性分析（PCRRFLP）。PCR引物（228 bp)： 　　上游：5’CAGGAGGACAGAGCACGAG3’ 　　下游：5’CGAAGGTGGCTGAGGCTAG3’ 　　PCR循环参数：95 ℃变性5 min，95 ℃ 30 s→57 ℃ 45 s→72 ℃ 30 s，进行35个循环，最后72 ℃延伸10 min。PCR产物中加入1 μL限制性内切酶Sty1，37 ℃孵育酶切7～8 h，产物用2%琼脂糖胶电泳，结果用凝胶成像系统分析。 　　1.2.2 免疫组织化学染色 采用二步法免疫组织化学染色。p73蛋白阳性物质定位于细胞核，呈棕黄色或棕褐色颗粒。阳性判定标准：在显微镜中倍视野（10×10）下观察阳性细胞分布情况，分别取4～5个独立的高倍视野（10×40），各计数200～250个细胞，阳性细胞lt;10%为阴性，阳性细胞gt;10%为阳性。比较结直肠腺癌和腺瘤以及远离病灶正常组织的细胞染色密度。 　　1.3 统计学处理 SPSS 12.0统计软件包进行统计学处理。采用χ2检验和Fisher确切概率法分析p73基因的多态性以及p73蛋白的表达在结直肠腺癌、腺瘤以及正常组中的差别，Plt;0.05为差别有统计学意义。 　 　2 结果 　　2.1 p73基因多态性 当有AT时，酶切AT为156和72 bp 2个产物，GC型不能被Sty1酶切，仍为228 bp产物（图1）。p73基因多态性在结直肠腺癌、腺瘤组和正常组中的分布见表1。腺癌组和腺瘤组比较，χ2=1.703，Pgt;0.0125，提示p73基因在腺癌组和腺瘤组基因型频率分布无显著差异；腺癌组和正常组比较，χ2=9.713，Plt;0.0125，提示p73基因在腺癌组和对照组基因型频率分布有统计学意义；腺瘤组和正常组比较，χ2=5.378，Pgt;0.0125，提示p73基因在腺瘤组和正常组基因型频率分布无显著差异。并提示AT/AT基因型的人群易患结肠肿瘤。 　　图1 PCR扩增产物经酶切后琼脂糖电脉结果（略） 　　Fig 1 Restriction analysisof p73 gene 　　表1 p73多态性在腺癌、腺瘤和对照组中的分布（略） 　　Tab 1 The distribution of the p73 genotypes frequencies 　　表中数据为n(%). χ2=10.066，Plt;0.05. 　　2.2 p73蛋白在结直肠组织中的表达情况 p73蛋白表达定位于腺癌细胞的细胞核中，呈灶性或弥漫性分布，在结肠腺癌中呈阳性表达(图2)，在腺瘤组及对照组表达减少或不表达（图3，表2）。 　　表2 p73蛋白在腺癌、腺瘤和远离癌灶的正常组织中的表达（略） 　　Tab 2 The expression of p73 protEin in colorectal adenocarcinoma, adenoma and healthy group 　　表中数据为n. χ2=15.417，Plt;0.05. 　　3 讨论 　　Hamajima等对日本人的研究未发现p73基因型与结直肠腺癌患病风险有联系；Li等对美国人进行头颈部肿瘤的研究，得出AT/AT基因型的人有着一定的结直肠