实验十三动物组织核酸的分离﹒鉴定和含量测定.pptVIP

动物组织核酸的分离纯化及鉴定 1. 猪肝DNA和RNA的分离 2. 核糖和脱氧核糖的显色实验 3. 核酸的定量和纯度测定 DNA和RNA的结构 组成核酸的戊糖有两种。DNA所含的糖为 β-D-2-脱氧核糖；RNA所含的糖则为β-D-核糖。 1. 猪肝DNA和RNA的分离 核酸分离的原则 核酸存在于多种细胞，因此分离方法复杂而多样。又因各种DNA、RNA的含量差异，各种分析方法对核酸的纯度及量的要求有差异，因此在实验前应对所采用的方法有所了解和选择。总的说来核酸的分离与纯化是在溶解细胞的基础上，利用苯酚等有机溶剂抽提（核酸溶于缓冲液，即水相），分离，纯化；利用乙醇、丙酮等有机溶剂沉淀，收获。 核酸分离的一般步骤 DNA和RNA分离的基本原理 根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离，然后用蛋白质变性沉淀剂去除蛋白，使核酸释放出来，再利用核酸不溶于乙醇的性质将核酸析出，达到分离DNA和RNA的目的。 在0.14mol/L的氯化钠溶液中，RNA核蛋白溶解度大，而DNA核蛋白溶解度小；相反在1mol/L的氯化钠溶液中，DNA核蛋白的溶解度大，而RNA核蛋白的溶解度小，从而使DNA和RNA核蛋白分开。 酚：氯仿：异戊醇抽提 酚：有效的使蛋白质变性，不能完全的抑制RNA酶的活性，能溶解带有长poly(A)的RN