大肠杆菌感受态.docVIP

重庆大学研究生专业实验教学 实验报告书 实验课程名称： 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 实验指导教师： 胡廷章 学 院： 生物工程学院 专业及类别： 生物学（学术） 学 号： 20131902025 姓 名： 秦钟梁 实验日期： 2014年4月 成 绩： 重庆大学研究生院制 实验目的 了解感受态细胞生理特性及制备条件，掌握CaCl2大肠杆菌感受态细胞方法。E. coli DH5α菌株pMD19-T质粒载体； 仪器：培养皿恒温摇床聚丙烯管电热恒温培养箱台式高速离心机无菌工作台烧瓶恒温水浴锅低温冰箱制冰机分光光度计微量移液枪锥形瓶试管LB固体培养基LB液体培养基CaCl2，氨苄青霉素（Amp）。 实验原理 细菌处于容易吸收外源DNA的状态叫感受态。转化是指质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。其原理是：在0℃下的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA形成不易被DNA酶所降解的羟基—钙磷酸复合物，此复合物粘附于细菌细胞表面。42℃短时间热处理（热休克），可以促进细胞吸收DNA复合物。将处理后的细菌放置在非选择性培养液中保温一段时间，促使在转化过程中获得的新的表型(如Amp抗性) 得到表达。然后再涂布于含有氨苄青霉素的选择性平板上，37℃培养过夜