五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究.docVIP

　　五指毛桃药材高效液相指纹图谱的实验研究 作者：席萍 黄耀海 黄月纯 蔡庆群 曹艳芳 【摘要】 目的建立五指毛桃药材的高效液相(HPLC)指纹图谱。方法采用高效液相色谱法，选用XDB－C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）。 柱温25℃；检测波长246 mm。流动相为甲醇-水。梯度洗脱：0 min，甲醇-水（15∶85）；20min，甲醇-水（55∶45），40 min；甲醇-水（85∶15）；45 min，甲醇-水（100∶0）；50 min，甲醇-水（15∶85）。流速1 ml/min；运行时间50 min；检测波长为246 nm。结果五指毛桃药材共有9个共有峰。 结论实验方法可行，可为检测五指毛桃药材质量控制标准提供 参考 。 【关键词】 五指毛桃 指纹图谱 高效液相色谱法 五指毛桃（Radix Fici）为桑科植物粗叶榕Ficus hirta Vahl.的干燥根。最早称为无爪龙，记载于清代的《生草药性备要》，目前临床使用习称五爪龙，许多 现代 大型中药工具书称之为五指毛桃，商品名亦称五指毛桃［1］。2004年版《广东省中药药材标准》将其以五指毛桃的名称列入标准中［2］。本品为华南地区常用中药材，味甘，性平，有健脾补肺、利湿舒筋功能，主治脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、带下、产后无乳、风湿痹痛、水肿、肝硬化腹水、肝炎、跌打损伤，临床疗效显著。梅州地区宜将其作为食疗常用品，家喻户晓。研究表明五指毛桃药材的化学成分主要是补骨脂素以及佛手内酯、油酸、亚油酸、十六酸、十八酸等成分，这些成分在沸水中煎出均能产生香气,民间习惯以其香味的浓郁程度来判断其质量的优劣。 　　据 　　3.4 主要色谱峰的建立　分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μl，注入高效液相色谱仪，记录50 min的色谱图。检测指认结果9批五指毛桃药材的指纹图谱，与参照物补骨脂素的色谱峰（S）相对应的位置上，有一主要色谱峰，其占总峰面积的百分比约为50.26％～62.27％。50 min内有9个色谱峰是9批五指毛桃共有的。其在5号峰和6号峰（保留时间约在23.5 min和27 min）的位置更具有特征性，为主要共有峰，5号峰对应为补骨脂素的色谱峰（S）。因此，最终确定9个色谱峰为共有指纹峰见图1，共有指纹峰的保留时间见表2，峰面积百分含量见表3。 　　图1 五指毛桃药材色谱峰图（略） 　　表2 9批五指毛桃样品共有指纹峰的保留时间（略） 　　表3 指纹图谱主要共有峰的峰面积百分含量（略） 　　3.5 样品指纹图谱相似度分析 五指毛桃9批药材样品指纹图谱与相似度 计算 机软件（SPSS）得出的共有模式相比较，其相似度结果见表4。 　　4 讨论 　　由于五指毛桃药材成分复杂，实验中选择单一流动相无法达到很好的分离效果，而采用梯度洗脱可以在整个分析时间段（50 min）内，各色谱峰峰形尖锐，并能尽可能多地对各组分进行很好的分离，达到较好分离效果。我们考察了甲醇－水不同比例以及不同洗脱梯度的试验，结果表明，本实验所采用的流动相：0 min，甲醇-水（15∶85）；20 min，甲醇-水（55∶45）；40 min，甲醇-水（85∶15）；45 min，甲醇-水（100∶0）；50 min，甲醇-水（15∶85）。其分离效果较好。 　　在检测波长的选择中，采用二极管阵列检测器（DAD）检测，在215，246，270，290和320 nm中的色谱图进行比较，结果在246 nm处的色谱图中出峰较多，峰形较好，而且是五指毛桃药材主要成分补骨脂素的最大吸收波长,因此我们选取246 nm作为其指纹图谱的检测波长。 　　表4 与共有模式比较的五指毛桃样品相似度评价（SPSS软件）（略） 　　实验中制备五指毛桃样品液，我们选择7种提取溶剂系统即50%甲醇，甲醇，乙醇，醋酸乙酯，乙醚，氯仿，石油醚进行考察。结果显示在同样超声30 min的情况下，以甲醇的提取效果最佳。而对提取方法的考察，以甲醇为提取溶媒，分别采用浸泡24 h，加热回流2 h，索氏提取4h和超声提取30 min等4种提取方法的提取效率，发现甲醇热回流和甲醇超声提取对五指毛桃药材进行处理所得色谱图峰数较多，更能体现药材原有的面貌。经过实验比较，用甲醇超声提取30 min的操作相对简单，效果较佳，最后选定其作为本实验的提取方法。 　　实验结果显示，五指毛桃1～7号样品相似度均达到95%以上，说明其指纹图谱具有较高的相似性。8～9号样品相似度偏低，与其药材中参杂较多的茎枝部分有关。五指毛桃的药用部位主要是根，但据市场情况来看，不同地区采用根茎混用的情况是存在的。 　　测定结果表明，不同产地的五指毛桃药材指纹图谱的9个共有峰保留时间，均具有较好的重现性； 其中，1号