第1章色谱法的基本原理.pptVIP

第一章 色谱法的基本原理 1.1 色谱法概述 1.1.1 色谱法发展史 1903年，俄国植物学家Tswett 利用吸附原理分离植物色素而 发明色谱法(chromatography) 。 1941年Martin A J P和Synge R L M发明液液分配色谱、获1952年 诺贝尔化学奖。 1952年Martin A J P和James A T发明气相色谱(gas chromatography, GC) 70年代发展了高效液相色谱(High-performance liquid chromaotgraphy, HPLC)成为重要分离分析技术 80年代Jorgenson J W等的研究工作推动了高效毛细管电泳(High-performance capillary electrophoresis, HPCE)高速发展 1.3 色谱流出曲线 1.3.1、色谱峰 1.峰高 色谱峰顶点与基线之间的距离，以h表示，如图中AB 2．标准偏差σ 0.607h处，拐点处，峰宽正好为2σ 3．峰面积A A＝1.065hY1/2 4．半峰宽Y1/2 Y1/2=2.354σ 5．峰底宽 Y=4σ， 拐点作切线与基线相交，相交两点，两点间距 离为峰底宽，如图中AB。σ、Y1/2、Y统称为区域宽度 保留值是用来描述待测试样中各组分在色谱柱中滞留情况的物理量，通常用距离或将各组分带出色谱柱所需的载气体积（或时间）表示。在一定的固定相和操作条件下，任何一种物质都有一个固定的保留值，故组分的保留值可用于该组分的定性鉴定。 1．死时间tM 不被固定相吸附或溶解的组分从进样开始到柱后出现响应信号极大值时所需时间。对于气相色谱，常把空气（热导检测器）和甲烷（氢火焰离子化检测器）从进样到出峰的时间称为死时间。 2．保留时间tR 试样从进样开始到柱后出现峰极大点时所经历的时间，称为保留时间，如图 O‘B′。它相应于样品到达柱末端的检测器所需的时间。 3. 调整保留时间 扣除死时间后的保留时间。 tR′=tR－tM 4. 流动相的流速 1.4 塔板理论 有效塔板数和有效塔板高度  1956年荷兰学者范弟姆特(Van Deemter)提出了色谱过程的动力学理论，导出了塔板高度 H与载气线速度u 的关系式： A─涡流扩散项 B/u —分子扩散项 C ·u —传质阻力项 1.6.1 色谱定性鉴定方法 与其他分析仪器联用的定性方法 1.6.2 色谱定量分析方法 1.6.3 常用的几种定量方法 （1）归一化法： （2）外标法 三种定量方法的对比 液相传质过程：指待测试样组分从固定相的气液界面移动到液相内部，发生质量交换以达到分配平衡，然后又返回气液界面的传质过程。 Cl：液相传质阻力系数 df：固定相液膜厚度 Dl：组分在液相中的扩散系数(m2/s) 减小液膜厚度df，增大组分在液相中的扩散系数Dl，均可提高柱效。 30 担体 (Substrate) 固定液(Liquid stationary phase) 组分(Component) dp df 31 范氏方程说明了在色谱分离条件的选择中，填充 均匀程度、填充物的粒度、流动相的种类及流速、 固定相的液膜厚度等对柱效和峰展宽的影响 32 33 2．分子扩散项(纵向扩散项)B/u B＝CdDm Cd：常数 Dm：分子在液相中扩散系数 一般Dg＝10－1cm2/s，Dm＝10－5cm2/s，所以对于液相色谱，这一项可忽略。 34 1.5.2 液相色谱法 1．涡流扩散项A A＝2λdp λ：填充不规则因子 dp：填充物平均直径 3．传质阻力项Cu 固定相传质阻力项 滞留的流动相传质阻力项 流动相滞留在一个局部，一般停滞不动，Csm与液相中流动相的多少及k有关。 Cs与容量因子k有关, df ：液膜厚度 流动相传质阻力项 Cm与k有关 35 36 1.6 分离度　 1.6.1 定义 分离度Rs是相邻两组分色谱峰保留值之差与两个组分色谱峰峰底宽度总和的一半的比值。 Y1，Y 2：两组分色谱峰峰底宽度 ：两组分保留时间 37 分离度R是既能反映柱效率又能反映选择性的指标，称总分离效能指标。分离度又叫分辨率 R=0.8：两峰的分离程度可达89%，有部分重叠； R=1　：分离程度98%； R=1.5：达99.7%（相邻两峰完全分离的标准）。 38 热力