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液相色谱培训ppt精要
高效液相色谱培训;基本原理和特点
液相色谱仪器部件
实验操作与应用
;基本原理和特点;岛津液相色谱仪结构;启动液相色谱仪器的流程
;高效液相色谱仪组成;;液相柱---保留值与pH的关系; 流动相类别;对溶剂的要求;不管采用何种途径,配制流动相应用新鲜水,水质要求越高放置时间越短。
理想的HPLC用水应为18.2Ω的超纯水,并通过0.22um的滤膜,除去热源、有机物、无机离子及空气等。 ;过滤:0.45um或更小孔径滤膜
目的:除去溶剂中的微小颗粒,避免堵塞色谱柱,尤其是使用无机盐配制的缓冲液。
脱气:除去流动相中溶解或因混合而产生的气泡
气泡对测定的影响:
1)泵中气泡使液流波动,改变保留时间和峰面积
2)柱中气泡使流动相绕流,峰变形
3)检测器中的气泡产生基线波动
;流动相的保存;;色谱柱的连接
;锥箍锥度不合适造成渗漏
;除去柱??端固定相变色部分 (约3mm左右),再补充新的固定相。
色谱柱吸附未被洗脱成分时,柱效将明显下降,选合适的溶剂进行洗净。
采用梯度洗脱时,柱在重复使用前,用泵把几倍于柱体积的起始溶剂压经柱子,以重新建立起始的平衡来得到再生。
;HPLC检测器应提供的功能;理想的HPLC检测器;灵敏度:信噪比;;吸光度检测器(UV/Vis)- 优点;吸光度检测器(UV/Vis)- 缺点;溶剂混合的基线噪音;为何如此重要?;谢谢!
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