细胞遗传学作业.docVIP

学号:2012802162 姓名：穆琛 学院：植保学院 专业：植物病理学专业 1.通过有丝分裂中期染色体的制片，写出有丝分裂中期能观察到哪些染色体的形态学特征？同时，结合自己的实验操作，总结出有丝分裂中期染色体制片的操作流程及注意事项？ （1）有丝分裂中期的主要表现是纺锤体的形成，染色体在纺锤丝的牵引下排列在细胞的赤道面上，形成赤道板。中期染色体浓缩变粗, 染色体数目清晰，形态固定,一般能看到染色体的典型结构，从而我们可以观察到染色体的数目、长度、着丝粒、臂比和次缢痕等形态学特征。 （2）有丝分裂中期染色体制片的操作流程： 材料的准备和取材： 种子浸泡于水中，种子吸胀后将种子捞出，放在垫有滤纸的培养皿中。置于25度条件下（温箱）发芽。待根长约1－1.5cm时此时大量细胞进行分裂时剪根(一般以上午10:30-11:30为宜)。 预处理： a：目的：获得较多的有丝分裂中期分裂相；使染色体收缩变短. b：预处理方法： 化学方法：秋水仙素、8-羟基喹啉、(-溴萘等。 低温方法：小麦1-5度；水稻、玉米6-8度约20-40小时。 剪取根尖放入盛有蒸馏水的指形管中，再置于冰水共存的冰瓶中，将冰瓶置0-3度冰箱处理24小时。染色体数目较多的材料可适当延长处理时间。 固定： 要求采用一定浓度的渗透力强的固定液将植物的组织、细胞迅速杀死，使蛋白质沉淀并尽量保持其原有状态。 常用的固定液：Carnoy I:冰醋酸：纯酒精＝1：3 时间：24h 解离、染色： 酸解法、酶解法 染液：洋红：醋酸洋红；Schiff试剂 目的是使细胞易于分散，便于压片。 压片操作： 将根尖放在载玻片2/3处，切取尖端不透明部分，滴上一滴45％冰醋酸，用解剖针在盖玻片上轻轻敲打，使材料成一片很均匀的薄层。在酒精灯上微热，使根尖软化,然后将载玻片放在硬而平整的桌面上，用中指或拇指压片。 在显微镜下挑选染色体分散而完整的片子，在片子纵向一侧用铁笔写上编号,置于－70℃冰箱或液氮中冻片约20秒，然后用刀片揭开盖玻片,置无水已醇中脱水约10分钟。 脱水:100%ETOH 室温10分钟。 （3） 注意事项： 在制片时所取的材料部位为被醋酸洋红染色较深的一端，同时要将材料尽量至于载玻片和盖玻片中心，防止材料游离出盖玻片同时也便于观察。 加热玻片时要注意来回移动玻片，时间不要过长，一到两个来回即可，以防染色体被煮沸，导致实验失败。 在敲片时要注意：a、在盖玻片一角下方垫上一刀片，以使载玻片和盖玻片之间留有一定空隙，有助于细胞的均匀分散；b、敲片时首先在中心敲击一下然后在四周均匀敲击，交替敲击；c、敲击力度要均匀，防止敲碎盖玻片；d、敲片用解剖针尖，将材料敲至看不到醋酸洋红的颜色，成云雾状即可；e、敲片过程中一定要固定好盖玻片，可以左手食指按住玻片的左下角勿动。 压片时，用大拇指向下压，一定要用垂直向下的爆发力，若发生偏斜， 则染色体会呈现扁平状，不利于染色体的观察。滴加的冰醋酸不能太多，一小滴即可。 2.什么是染色体的核型和核型分析？有丝分裂中期和减数分裂粗线期染色体核型分析所依靠的形态指标分别是什么？ 答：1、染色体核型是指染色体组在有丝分裂中期的表型, 是染色体数目、大小、形态特征的总和。染色体核型分析是在对染色体进行测量计算的基础上, 进行分组、排队、配对, 并进行形态分析的过程。 2、1）有丝分裂中期核型分析的形态指标： 1. 染色体排列于赤道板上2. 染色体高度螺旋化3. 适于进行细胞学研究 2）减数分裂粗线期核型分析的形态指标： 染色体长度 常、异染色质 染色粒数目和分布 端粒 核仁组织区的有无和位置 着丝粒位置 3.什么是染色体的分带技术？染色体C-分带技术在植物育种中有哪些方面的应用？结合自己的实际操作，总结出制备好一张优良的染色体C-分带制片，要注意哪些事项？ （1）染色体的分带技术：通过一定的酸碱，盐，温度等对染色体进行处理，借助染色，在染色体的特定部位呈现深浅不同的帯纹，用来鉴别个别染色体组，深入研究染色体的成分结构与功能的一种细胞学技术。 （2）染色体C-分带在植物育种中的应用： 染色体分带技术可以使染色体专一部位有区别染色，利用它对各个物种个别染色体的多态性和相对稳定性进行外援遗传物质的鉴定，当受体亲本与外缘供体的染色体可以显带并具有不同的带型时根据其带型特征可以准确检验出导入受体亲本背景中的外缘染色体是哪一条或哪一对染色体。 染色体C分带技术可以对一些优质基因在染色体上的进行准确定位，具体有染色体标图，染色体工程育种等应用。 （3）