第七章 各类显微镜简介-课件.pptVIP

* * 第七章 各类显微镜简介 普通生物显微镜 荧光显微镜 荧光显微镜和普通显微镜的区别： ??? 1.照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上。 ??? 2.光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜。 ??? 3.有两个特殊的滤光片 激发滤光片：位于光源前，滤除可见光，透过紫外光。 吸收滤光片：位于目镜和物镜之间，滤除紫外线，用以保护人的眼睛。 落射式荧光显微镜 微管呈绿色、微丝呈红色、细胞核呈兰色 荧光显微照片 偏光显微镜（polarizing microscope） 用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。 和普通显微镜不同的是： 1.光源前有偏振片（起偏器），使进入显微镜的光线为偏振光。 2.镜筒中有检偏器（一个偏振方向与起偏器垂直的的检偏器）。 3.载物台是可以旋转的，当载物台上放入单折射的物质时，无论如何旋转载物台，由于两个偏振片是垂直的，显微镜里看不到光线，而放入双折射性物质时，由于光线通过这类物质时发生偏转，因此旋转载物台便能检测到这种物体。 偏光显微镜的光路图 偏光显微镜 偏光显微镜下的碎屑岩组分 相差显微镜（phasecontrast microscope） 观察未经染色的标本和活细胞。 结构特点： ??? 1.环形光阑（annular? diaphragm） 位于光源与聚光器之间，使透过聚光器的光线形成空心光锥，焦聚到标本上。 2.相位板（annular phaseplate）在物镜中加了涂有氟化镁的相位板，可将直射光或衍射光的相位推迟1/4λ。分为两种：A+相板：将直射光推迟1/4λ，两组光波合轴后光波相加，振幅加大，标本结构比周围介质更加明亮，形成亮反差（或称负反差）。 B+相板：将衍射光推迟1/4λ，两组光线合轴后光波相减，振幅变小，形成暗反差（或称正反差），结构比周围介质更加变暗。 相差显微镜 相差显微镜的工作原理 相差显微镜显微照片 倒置显微镜 物镜在载物台之下，照明系统在载物台之上，用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。 微分干涉差显微镜 （differential interference contrast microscope）简称DIC显微镜。 显示结构的三维立体投影影像，适合于显微操作。像基因注入、核移植、转基因等的显微操作常在这种显微镜下进行。 DIC利用的是偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器（polarizer）、DIC棱镜、DIC滑行器和检偏器（analyzer）。 微分干涉差显微镜的光学原理 微分干涉差显微镜下的硅藻 暗视野显微镜（dark field microscope） 特点：聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进入物镜，只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜。因而视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的。 利用这种显微镜能看到小至 4~200nm的微粒子，分辨率可比普通显微镜高50倍。 暗视野显微镜的光学原理 暗视野显微镜下的莱姆病毒 激光扫描共聚焦显微镜（Laser scanning Confocal Microscopy ，简称LSCM） 在荧光显微镜成像的基础上加装激光扫描装置，使用紫外光或可见光激发荧光探针，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图象。 由于物镜和会聚透镜的焦点在同一光轴上，因而称这种方式成像的显微镜为共聚焦显微镜 。 激光扫描共聚焦显微镜成像原理 激光器发出的激光束经过扩束透镜和光束整形镜，变成一束直径较大的平行光束，长通分色反射镜使光束偏转90度，经过物镜会聚在物镜的焦点上，样品中的荧光物质在激光的激发下发射沿各个方向的荧光，一部分荧光经过物镜、长通分色反射镜、聚焦透镜会聚在聚焦透镜的焦点处，再通过焦点处的针孔，由检测器接收。再利用计算机的图像处理及三维重建软件，可以得到高清晰度的图片。 *