养精种玉汤对CHL细胞株染色体畸变影响研究.docVIP

　　养精种玉汤对CHL细胞株染色体畸变影响研究 作者：赵新广， 尤昭玲， 刘丹卓 【摘要】 　　目的探讨养精种玉汤对CHL细胞株染色体畸变的影响，对其遗传安全性进行研究。方法采用CHL细胞培养技术，设养精种玉汤不同剂量对CHL细胞进行体外染毒，观察其致CHL细胞株染色体数目及结构变化。结果在5 000，2 500，1 250 μg/ml不同测试剂量浓度下，无论24 h及48 h收集细胞，并在+S9与-S9两种测试条件下，进行染色体畸变分析，各剂量组、溶剂对照染色体畸变率均在正常范围。结论养精种玉汤在实验所确定的5 000 μg/ml测试剂量浓度以下，初步认为无诱发CHL染色体畸变作用。 【关键词】 养精种玉汤　 遗传毒性　 CHL细胞染色体畸变试验 　　Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Yang Jing Zhong Yu Decoction on CHL chromosomal aberration.MethodsThe CHL cell osomal variety of CHL osomal aberration rates al for Yang Jing Zhong Yu Decoction at the concentrations of 5 000,2 500,1 250 μg/ml，and collecting time points after 24h and 48h，mixing into S9 or non-mixing into S9 in all Yang Jing Zhong Yu Decoction groups. ConclusionThe experiment effects indicate that it has no geic toxicity of Yang Jing Zhong Yu Decoction at the concentration of 5 000 μg/ml. 　　Key osomal aberration test 养精种玉汤乃清代山西太原府名医傅山所创，出自《傅青主女科》，原为 治疗 身瘦不孕，后经多年来临床医家们的反复实践与锤炼，现已演绎成为治疗不孕症的基础方。养精种玉汤广泛用于种子期,其药效已较为肯定,但其临床运用安全性研究至今未见详细报道，并缺乏临床运用后安全性流行病学调查资料。鉴于此，本研究通过其不同剂量对CHL细胞株体外染毒，进行遗传毒性测定,以期获得其继药效学之后的临床前毒效学资料，为其种子期合理和安全应用提供实验学依据。 　　 1 材料与仪器 　　1.1 药液制备对所需中药材的来源及品种进行鉴定，筛选优质正品，原料经品种鉴定无误后，再进行挑选和洗净，然后炮制、切片、烘干、粉碎。严格按照经典处方比例用量配备，采用制备工艺如下：① 取经加工炮制的标准中药饮片（白芍、山茱萸）用70%乙醇回流提取2次，1 h/次，合并提取液滤过，回收乙醇;②其余药与白芍、山茱萸药渣混合，水液煎煮2次，1.5 h/次，合并滤液，滤过滤液浓缩至相对密度为1.1～1.2（50～60℃），加入乙醇使醇含量达65%，冷藏24 h，醇液滤过，滤液回收乙醇，至无醇味；③ 以上两液合并，冷藏放置，视无沉淀析出；④ 添加蒸馏水，调pH值至6.5～7.0, 并调整至相当于含生药2 g/ml；⑤ 精滤、灌封、灭菌即得。 　　1.2 细胞株 中国 仓鼠肺细胞（CHL）由中国药品生物制品鉴定所提供。由液氮冷冻保存。采用细胞培养基为F12培养液补加10%胎牛血清，在37℃、5%CO2、饱和湿度环境中培养。 　　1.3 试剂与仪器HAM F12培养基：GIBCO公司出品；胎牛血清：北京元亨金马出品；DMSO：北京化学试剂公司出品；天平：瑞士METTLER TOLEDO AL204DU-IC型；生物安全柜：美国Labconco DELTA型；恒温摇床：上海智城ZHitomycin C),代号MMC，来源于Kyol-1母液，现用现配，稀释成25 μg·ml-1应用液。 　 　2 方法 　　2.1 S9活化系统制备取体质量160～200 g的健康Sprague-Dal。同时设溶剂对照、S9对照及阳性诱变剂对照。 　　2.3 操作步骤及检测指标①取处于对数生长期的CHL细胞培养体系，正常对照或3个剂量组分别加入相应剂量的应用液，加样体积均为40 μl，阳性对照按照各自的浓度要求加入适当体积的溶液。其中，在-S9mix的条件下，不同浓度药物的作用时间各取两个时间点，即24 h和48 h；+S9mix 时药物作用于细胞的时间为6 h，然后换新鲜培养液继续培养24 h和48 h。②终止培养前2 h秋水仙碱处理; 0.25%胰蛋白酶液消化;