刺五加多糖对人白血病K562细胞作用的研究.docVIP

　　刺五加多糖对人白血病K562细胞作用的研究 作者：罗强 孙黎 刘芳 薄爱华 【摘要】 目的: 研究 刺五加多糖对体外培养人白血病K562细胞有无增殖抑制和凋亡诱导作用。 方法 :取培养至对数生长期的K562细胞（密度为5×104/mL和1×106/mL）分别接种于96孔培养板（100μL/孔）及50mL培养瓶（1.5mL/瓶）中，加入不同浓度的刺五加多糖作用24h 后，用CCK8法检测刺五加多糖对K562细胞增殖抑制作用；荧光显微镜检测细胞凋亡。 结果:不同浓度刺五加多糖（0.405、0.810、1.620、2.430、3.240mg/mL）作用K562细胞24 h，抑制率分别为16%、27%、48%、50%、55%；荧光显微镜下观察发现培养K562细胞中出现核固缩、凋亡小体。结论:刺五加多糖对体外培养K562细胞生长有明显的抑制作用，可诱导K562细胞凋亡。 【关键词】 刺五加属 K562细胞 细胞凋亡 【ABSTRACT】 Objective:To investigate an K562 in vitro.Methods:Cells（5×104/mL)idexponential phase and then L culture bottles for 1.5mL each.Cells easured ethod.Apoptosis orphology icroscope orphology changes such as cell contraction （0.405、 0.81、 1.62、 2.43、 3.24mg/ mL）VS（16%、27%、48%、50%、55%),and apoptotic bodies under fluorescence microscope,and shoernt through agrose electrophrosis.In addition,the apoptosis etic analysis and shopas,日本)及美国Stat Fax2100型酶标仪等。 1.2 刺五加多糖的制备 称取5.0g经清洗、烘干、去梗后粉碎的刺五加，置于250mL圆底烧瓶中，按正交表，加入相应的溶剂，充分振荡，浸泡1h后于恒温水箱中回流提取（每隔10min振荡一次），过滤。再按同法二次提取，合并滤液，减压浓缩，定容至25.00mL,8磅15min高压灭菌4℃保存。 1.3 细胞培养 RPMI1640培养基中加入10%胎牛血清、庆大霉素100U/mL。用7.6%NaHCO2调至pH7.4，复苏K562细胞株，在RPMI1640培养液中,37℃、5%CO2饱和湿度下培养，至对数生长期。 1.4 CCK8比色法 取对数生长期的K562细胞（密度为5×104/mL）接种于96孔培养板上,100μL/孔。 刺五加多糖以RPMI1640培养液稀释成不同浓度（0.405、0.810、1.620、2.430、3.240mg/mL）加入96孔培养板，100μL/孔，每组设4个复孔。对照组加入等体积培养液，培养24h。实验终止前4h加入CCK8试剂20 μL/孔，继续培养4h后于酶标仪490nm波长处下测OD值，按下列公式 计算 生长抑制率:抑制率（%）=（1－实验组平均OD值/对照组平均OD值）×100%。 1.5 荧光显微镜观察 取对数生长期K562细胞（密度为1×106/mL）分别接种于6只50mL的培养瓶，1.5mL/瓶，实验组分别加入上述不同浓度的刺五加多糖1.5mL,对照组加入1.5mL培养液。培养24h后，1500×g离心7min，收集K562细胞，按照细胞凋亡Hoechst染色试剂盒说明操作，荧光显微镜下观察并拍照。 2008年10月罗 强等：刺五加多糖对人白血病K562细胞作用的 研究 第5期2008年10月河北北方学院学报（医学版）第5期 2 结果 2.1 刺五加多糖对K562细胞增殖的抑制作用 0.405、0.810、1.620、2.430、3.240mg/mL五种浓度刺五加多糖作用K562细胞24h后，对细胞的生长有不同程度的抑制作用，随着刺五加多糖浓度的增加，肿瘤细胞抑制率增加（Plt;0.05），分别为16%、27%、48%、50%、55%，见表1。表1 不同浓度刺五加多糖对K562细胞增殖作用 　　2.2 K562细胞凋亡的形态学观察 荧光显微镜观察，对照组（图1A），镜下可见细胞着色均匀，无凋亡细胞，说明对照组细胞的胞膜完整，未出现凋亡细胞。经刺五加多糖处理组（图1B、C、D、E、F，B0.405mg/mL、C0.810mg/mL、D1.620mg/mL、E2.430mg/mL、F3.240mg/mL，刺五加