基因工程药物制.pptVIP

质粒不稳定的原因？ ⑴含质粒菌产生不含质粒子代菌的频率，质粒丢失率与宿主菌、质粒特征和培养条件有关。 ⑵这两种菌比生长速率差异的大小。丢失质粒的菌体在非选择性培养基中一般具有生长优势，在培养中会逐渐取代质粒菌而成为优势菌。 * 提高质粒稳定性的方法 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素 实现高密度发酵的方法 包含体形成的原因 包含体的优势。 简述菌体生长与能量的关系 基因工程药物的质量控制包括那几个方面？ 基因工程药物怎样保存？ * 提高质粒稳定性的方法 选择合适的宿主菌 选择合适的载体 选择压力 分阶段控制培养 控制培养条件 固定化 * 影响目的基因在大肠杆菌中表达的因素 ⑴外源基因的拷贝数 ⑵ 外源基因的表达效率 ①启动子的强弱 ②核糖体接合位点的有效性 ③SD序列和起始密码ATG的间距 ④密码子组成 ⑶表达产物的稳定性 ⑷细胞代谢负荷 ⑸工程菌的培养条件 * 实现高密度发酵的方法 1发酵条件的改进 ①培养基的选择 ②建立流加式培养 ③提高供氧能力 2构建出乙酸化能力低的工程化宿主菌 3构建蛋白水解酶活力低的工程化宿主菌 * 包含体形成的原因 主要是高水平表达的结果。 在高水平表达时，新生肽链的聚集速率超过蛋白的正确折叠的速率就会导致包含体的形成。 重组蛋白在大肠杆菌中表达时，缺乏一些蛋白折叠过程中需要的酶和辅助因子，如折叠酶和分子伴侣等。 * 1、富集目标蛋白：包含体具有高密度，易于分离纯化的优势； 2、抗蛋白酶：重组蛋白以包含体的形式存在有效地抵御了大肠杆菌中的蛋白酶对目的蛋白的降解； 3、对宿主毒性小：生产那些处于天然构象对宿主细胞有毒害的蛋白有优势。 包含体的优势 * 简述菌体生长与能量的关系 碳源通过有限的呼吸能力所提供的最大能量决定了菌体的最大比生长速率。当菌体生长所需能量大于菌体有氧代谢提供的能量时，由于呼吸链或三羧酸循环的供能不足，菌体会产生乙酸。必须控制菌体生长，从而控制乙酸的产生，减少它的抑制作用。 * 怎样保存基因工程药物？ ⒈ 液态保存 （1）低温保存：在-10到-20°C以下冰冻保存。 （2）在稳定pH条件下保存：调到稳定的pH 范围内 （3）高浓度保存：在高浓度时比较稳定。 （4）加保护剂保存：多元醇、有机溶剂、巯基乙醇 2、固态保存 含水量降到5%时，在室温或冰箱中保存均比较稳定。长期保存最好方法是制成干粉或结晶。放在干燥器中在4°C可保存相当长的时间。 * 1原材料的质量控制 2培养过程的质量控制 3纯化过程的质量控制 4目标产品的质量控制 5产品的保存 基因工程药物的质量控制包括那几个方面？ * 转录RNA为DNA的酶（ ） 能降解单链DNA和RNA ，打开cDNA双链的发卡结构（ ） 连接3’ 羟基 5’磷酸游离端（ ） 催化一个单核苷酸转移到一个DNA分子的3’羟基末端（ ） 逆转录酶 核酸酶S1 T4DNA连接酶 末端脱氧核苷酰转移酶 * 获得目的基因的方法（ ）和（ ） 蛋白质保存在稳定的pH下， pH是指（ ）pI。 目前使用最广泛的制备基因工程药物的宿主菌是（ ）和（ ）。 逆转录法 化学合成法 接近 大肠杆菌 酿酒酵母 * 当菌体生长所需能量（ ）菌体有氧代谢提供的能量时，菌体会产生乙酸， 高密度发酵：指培养液中工程菌的菌体浓度在（ ）以上， 包含体的复性过程中，（ ）蛋白浓度可以减少中间体形成提高复性率。 大于 50gDCW/L 降低 * 第十三节　基因工程药物制造实例 干扰素是真核细胞对各种刺激作出反应而自然形成的一组复杂的蛋白质。 干扰素除具有广谱抗病毒活性，还具有抑制细胞分裂，特别是抑制肿瘤细胞生长和免疫调节等功能，作为一种生物活性蛋白有着良好的临床应用价值。 * 干扰素是人体防御系统的重要组成部分。根据分子结构和抗原性的差异分为α、β、γ、ω等4个类型。α型干扰素在分为α1b、α2a、α2b等亚型，其区别仅表现为个别氨基酸。 是我国已经批准上市的基因工程药物。 早期获得方法：用病毒诱导人白血球(白细胞)产生，产量低，价格贵。300L人血才提取1mg 。 * 2003年抗非典期间，江南大学与丽珠集团苏州新宝制药厂合作攻关，通过发酵工程和生物制药工程研制成功了重组人α-2b干扰素口鼻腔喷雾剂，解决了干扰素常温保存稳定性问题。在疫区特殊人群捐赠使用，效果显著。 * 一、基因工程菌的组建 诱生的白细胞 提取全RNA 通过寡dT-纤维素柱