复件 微生物检测-.pptVIP

* 柠檬酸盐利用试验(citrate test)：取培养物接种于柠檬酸盐培养基，培养2-4天，斜面有菌苔生长，培养基由绿色变为蓝色时为阳性。 原理：柠檬酸盐利用培养基是合成培养基，不含蛋白胨和糖类，以柠檬酸钠为惟一碳源，磷酸二氢铵为唯一铵盐，细菌在柠檬酸盐利用培养基生长，柠檬酸钠被分解生成碳酸钠与水，使培养基pH升高，溴麝香草酚蓝指示剂显蓝色。 * * 硫化氢试验 将细菌穿刺接种于三糖铁琼脂或克氏双糖铁琼斜面、或硫酸亚铁琼脂中，24-48h，培养基底层出现黑色即为阳性反应。 原理：细菌对培养基中硫代硫酸钠或硫酸钠、亚硫酸钠的有还原作用，生成硫化氢。硫化氢遇硫酸亚铁或柠檬酸铁铵产生不溶性黑色硫化亚铁。 * 血清学试验 假定试验：挑取经生化试验证实为大肠埃希氏菌的琼脂培养物，用各类大肠埃希氏菌的多价O血清做玻片凝集试验。当与某一种多价O血清凝集时，再与该多价血清所包含的单价O血清做试验。如与某一单价O血清呈强凝集反应，即为假定试验阳性。 证实试验:制备O抗原悬液,稀释至与MacFarland3号比浊管相当的浓度。将O血清用生理盐水稀释至1：40。在试管内等量混合，做试管凝集试验。混匀后在50℃水浴箱内16h后观察结果。出现凝集则可证实为O抗原。 * * 氧化酶试验 待检菌新鲜培养物 挑菌落于滤纸 36℃18-24h 氧化型色素 阳性 细胞色素氧化酶 四甲基对苯二胺盐酸盐 a-萘酚乙醇溶液1-2滴 还原型色素 吲哚酚蓝 避免同铁镍接触 避免用含葡萄糖培养基 菌落新鲜 试剂新鲜 有氧条件 * 三、MUG-Indole检查法 1.原理 97%的大肠埃希菌和部分志贺菌、沙门氏菌中含有?-葡萄糖醛酸苷酶（ ?-glucuronidase,GUD ）。利用目标菌的限定酶作用的底物4-甲基伞形酮-?-D-葡萄糖酸苷（4-Methylumbelliferyl- ?-D-Glucuronide, MUG）被?-葡萄糖醛酸苷酶分解，在366nm紫外灯下产生蓝白色荧光作为指示系统来鉴定目标菌。 但漏检率为6%，因此采用与吲哚反应相结合，辅以IMViC试验，在理论上检出率可达99%。24-48h可报告结果。 * 2.检验程序 供试品 供试液 BL增菌液 MacC EMB 疑似菌落纯培养 乳糖发酵 IMViC 报告 MUG蛋白胨 MUG+，I+ MUG-，I- MUG+，I- MUG-，I+ 革兰染色 报告 * 3.注意事项 配制MUG培养基时，务必校正pH值，pH不得过7.4，否则MUG管自身发荧光。 培养时间一般4h，24h，可延长48h。 结果观察时要将阳性对照管、阴性对照管和供试品的MUG管同时在366nm紫外灯下观察，如阳性管荧光强烈时，可移去，以免影响另两管的观测。 * 四、肠毒素检验 1.产毒培养：将试验菌株和对照菌株分别接于0.6mL产毒素培养基内，37℃振荡培养过夜。加入适量多粘菌素，37℃培养1h，4000r/min离心15min，取上清，加入适量硫柳汞，4℃保存待用。 2.ELISA（enzyme linked immunosorbent assay）检测LT和ST * 间接法 双抗体夹心法检测LT * 结果判定：以酶标仪在492nm下测定吸光度OD值，待测样本OD值大于阴性对照3倍以上为阳性。或目测为橘黄色。 * 抗原竞争法检测ST 抗原竞争法测ST * 结果判定： 以酶标仪在492nm下测定吸光度OD值。 阴性对照OD值-待测样本OD值 阴性对照OD值 目测无色或明显淡于阴性对照为阳性。 ×100%≥50% * 3 反向乳胶凝集法 （resersed passive latex agglutination, RPLA） 包被了抗体的乳胶粒子 毒素（抗原） * 检样 大肠菌群MPN 25g+营养肉汤 严重污染 乳糖发酵阳性管 菌落3-5个，氧化酶阴性 EMB Macc 肠道增菌肉汤 TSI、吲哚、尿素酶、KCN、LYS、动力 TSI底层+、H2S-、尿素酶-、KCN- 血清学试验 ETEC+ EPEC+、EHEC+、O157H EIEC+ 非左 非左 非大肠埃希菌 肠毒素+ 吲哚+、 LYS -、动力-、O124-/+ 产肠毒素大肠埃希菌 致病性或出血性大肠埃希菌 侵袭性大肠埃希菌 非致泻大肠埃希菌 五 检测程序图 * 快速检测 * 绿蓝色菌落为O157 红色菌落为大肠杆菌。 蓝色菌落为其它大肠菌群 * * * * 第五章 病原菌的检验 * 主要的食物导致的疾病 疾病 致病菌 潜伏期和特征 相关食品 沙门氏菌病 鼠伤寒沙门菌（S.typhimurium） 猪霍乱沙门菌（S.enteritidis） 8-48h;肠毒素和细胞毒素 肉类，家禽，鱼，蛋，乳制品 弓形