S6实验6植物茎尖的培养(理论).docVIP

实验六 植物茎尖培养（理论）病毒对寄主植物可造成毁灭性危害，导致大幅度减产，甚至全株死亡。潜隐性病毒侵染植物造成症状不明显的慢性危害，不易被发现，尤其危险。国内外解决作物病虫害的有效途径是培育无病毒苗，实施农作物无病毒化栽培。 所谓无病毒苗，是指不含该种植物的主要危害病毒，即经检测主要病毒在植物内的存在表现阴性反应的苗木。因此，培育无病毒母株，是获得无病毒苗的根本途径。 一病毒在植物体内的分布及危害 1、病毒在植物体内的分布 病毒侵染植物叶片后即增殖并向附近细胞转移，尽管速度很慢，但经过一段时间，叶片内病毒浓度达到一定量而到达韧皮部。 1943年，White首先发现已感染的烟草植株生长点附近烟草花叶病毒浓度很低，甚至没有。 1948—1949年，Holmes和Masset等证实了病毒的分布随植株不同部位和年龄而异。 ★老叶和成熟的组织中病毒含量高 ★幼嫩和未成熟的组织及器官中病毒含量较低 ★根尖、茎尖点约0.1~1mm区域中几乎不含病毒 病毒的传播：筛管组织、胞间连丝、营养体及刀具、土壤 茎尖分生组织无分化，没有维管组织2、病毒的危害 已发现的植物病毒超过500种，草莓病毒曾使日本草莓的产量严重下降，品质退化。 ★病毒危害极大 ★不能通过化学杀菌和抗生素进行防治和消除 ★研究脱毒方法意义重大 二植物脱毒的意义 1、能够有效地保持优良品种的特性 任何一种优良品种均需要有一个忠实地保存其遗传性状的繁殖方法。 离体无性繁殖：不会造成性状分离、不会产生退化、避免病虫害的侵染 2、快速繁殖品种，使优良品种迅速应用 离体繁殖周期短（1~3个月）、不受季节限制、繁殖系数高 3、生产无病毒种苗，防止品种退化 目前受病毒危害严重影响生产的有： 大田作物：马铃薯、甘薯、甘蔗、烟草 蔬菜：白菜、大蒜、葱、番茄、箩卜 果树：柑橘、苹果、草莓、香蕉 花卉：香石竹、各种菊花、天竺葵、紫罗兰 4、节约耕地，提高农产品的商品率 块根、块茎、鳞茎为繁殖器官的作物，每年产品用留作种的比例： 大蒜：留种量占产量的五到八分之一； 马铃薯：留种量占产量的十分之一； 贝母：留种量占产量的三分之一。 5、便于运输 常规的块根、块茎等，体细胞大、含水量高，包装运输十分不便，远距离运输损失很大 离体繁殖的种苗体积小，一般自带容器，很易携带，运输十分方便 以马铃薯为例子： 按一亩地4000株计算，常规薯4000个重200kg（每个50g），若用试管薯4000个则只有2kg（每个0.5g）。 三植物脱毒的原理和方法 （一）热处理脱毒法 1、热处理脱毒原理 病毒DNA分子进入细胞后随植物细胞的DNA一起复制。热处理并不能杀死病毒，只能钝化病毒的活性，使病毒在植物体内增殖减缓或增殖停止，而失去传染能力。 2、热处理方法 （1）愈伤组织热处理 离体培养 愈伤组织 热处理继代 分化培养。 常用处理温度及时间：低温37—38℃处理2周、4周或8周；或高温50℃处理3—5min。 （2）热空气处理脱毒法 将试验母株放在高温生长室中生长一阶段，使其顶端分生组织比次生分生组织生长迅速，然后切取其茎尖分生组织进行离体培养。生长室温度35—40℃。光照3000—10000lx。 3、热处理的局限性 （1）并非所有的病毒都对热处理敏感。一般的热的处理只对等径的、线状的病毒和类菌质体起作用。 （2）延长热处理时间，病毒钝化效果好，同时也可能会钝化植物组织中的抗性因子而降低处理效果。 （3）热处理后只有一小部分植株能够存活。 （二）组织培养脱毒法 包括微茎尖培养脱毒、愈伤组织培养脱毒、珠心组织培养脱毒3种方法。 1、微茎尖培养脱毒法 由于其脱毒效果好，后代遗传稳定，是目前植物无病毒苗培育上使用最广泛的一种方法。 （1）原理及依据 a、病毒在植物体内分布不均匀，越接近顶端分生组织，病毒浓度越稀，因此，可以采用小茎尖的离体培养脱除植物病毒。 b、病毒DNA分子与细胞分裂蛋白质合成竞争，在迅速合成的植物细胞中正常合成的蛋白质占优势。 （2）操作程序 外植体经表面消毒灭菌后，在解剖镜下，经无菌操作切取小茎尖，接种到备用培养基上，放入培养室内进行培养，并及时观察和记录培养结果。 2、愈伤组织培养脱毒法 （1）原理及依据 a、病毒在植物体内不同器官或组织分布不均匀； b、病毒复制的能力衰退或丢失； c、继代培养的愈伤组织产生抗性变异。 （2）技术关键 诱导可再生出植株的愈伤组织（3）操作程序 植物各种器官或组织诱导产生出愈伤组织，愈伤组织多次继代，然后从愈伤组织再诱导分化芽，长成植株。 愈伤组织培养脱毒法脱毒效果不定，另外经由愈伤组织产生的植株可能出现一些变异，这些变异往往是人们不希望出现的，这种脱毒的方法使用的不多