rhIL_12二硫键_N_糖基化位点及C端氨基酸序列分析_赵峰.pdfVIP

中国生物工程杂志 China Biotechnology ，20 14 ，34 (5):39-53 DOI :10 ． 13523 /j ． cb． 20 140506 檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪殏 檪 殏 檪 技术与方法 檪 殏 檪 殏檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪 rhIL － 12 二硫键、N － 糖基化位点及 * C 端氨基酸序列分析 1 2 1 2 2 1 ＊＊ 赵 峰 张宜俊 冉艳红 王兴勇 叶倩君 李弘剑 (1 暨南大学生命科学技术学院 广州 510632 2 广州市恺泰生物科技有限公司 广州 510663) 12 (rhIL-12) ， 、 摘要 重组人白细胞介素 是一种已经用于治疗肿瘤 寄生虫 病毒性感染及造血障碍 。 ， CHO 等疾病研究的异二聚体糖蛋白 结构确证是质量控制的重要内容 此研究对 细胞表达的 rhIL-12 、N- C ， Trypsin 、 二硫键配对方式 糖基化位点以及 端氨基酸序列进行了分析 使用 Chymotrypsin Glu-C rhIL-12 ， 和 三种酶分别对 进行非还原酶解 尽可能地在其所有半胱氨酸残基之 ， LC-MS / MS ， 间断裂而形成二硫键相连的肽段 然后使用 对酶解后的肽段样品进行分析 确定了 rhIL-12 7 。 rhIL-12 样品中存在和理论配对方式相符的 对二硫键 将 二硫键还原后并烷基化修饰 ， Trypsin ，Chymotrypsin GluC ， LC-MS / MS 保护 分别采用 和 进行酶解 并用 对酶解后肽段进行了质 C ， rhIL-12 p35 C 8 、p40 谱肽图及 端氨基酸序列分析 确定了 亚基 端氨基酸序列的 个氨基酸 亚基 C 15 。 rhIL-12 Trypsin ， 端氨基酸序列的 个氨基酸 对 样品还原及烷基化后用 变性酶解 所得肽段 H O H 18 O PNGase F 。 在 2 及 2 水中分别用 糖苷酶处理酶切产物 并通过二级质谱分析脱糖后糖肽 ， rhIL-12 3 N ， p35 7 1 85 段分子量变化