猪肉类罐头食品中总DNA提取方法的比较.pdfVIP

匾噩噩噩噩医噩噩噩噩. FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES DOI: 10. 13995/j. cnki. 11 -1802/ts. 201504012 猪肉类罐头食品中总 DNA 提取方法的比较* 杨彤晖1 ， 2 ，孟镇I ， 2 ，钟其顶l ， 2 ，仇凯1 ， 2 ，安丽艳l ， 2 ，李志军1 ， 2 1(中国食品发酵工业研究院，北京，100015) 2( 全国食品发酵标准化中心，北京，100015 ) 摘 要 以 7 种猪肉类罐头食品为研究对象，比较了 EEI0I -02 DNA 提取试剂盒、SDS 法、CTAB 法和异硫氨酸版 法对猪肉罐头食品 DNA 的提取效果。以 4 种方法提取的总 DNA 为模板，根据猪线粒体基因组 (mtDNA) 16s rRNA 基因和 Cyt b 基因，利用 3 对通用引物分别扩增片段大小为 244 bp( 16s rRNA) 、 376 bp( Cyt b) 、472 bp( Cyt b) 的目的片段，以评价不同方法提取的总 DNA 的效果。结果表明:不同提取方法提取效果差异明显一一异硫氨 酸肌法提取效果最好，其提取的 7 种罐头的总 DNA 均可利用 16s rRNA 和 Cyt b 通用引物分别有效扩增出 244 bp 、 376 bp 目的 DNA 片段，CTAB 法和 SDS 法次之，EEI0I-02 DNA 提取试剂盒提取效果最差。另外绝大多数猪 肉类罐头样品中未能扩增获得 472 bp 大小的目的片段，表明猪肉类罐头产品中 DNA 降解严重。 关键词 猪肉类罐头 ;DNA 提取;方法比较;动物源鉴别 近年来，肉制品的掺假事件层出不迭，其中尤以 1 材料与方法 低值肉类掺入冒充高值肉类最为严重。肉制品的真 1. 1 材料与试荆 实性鉴别己经成为行业内关注的热点问题之一。目 1. 1. 1 样品 前，动物源性成分鉴别方法主要有蛋白质鉴别[酶联 免疫吸附(ELISA) ，等电聚焦(IEF) ，高效液相色谱 7 种猪肉类罐头食品(表 1 ) ，从超市购买的鲜猪 ( HPLC) 等] [1 - 3] 和分子学鉴别[聚合酶链式反应 肉样品作为阳性对照。 (PCR) ， DNA 杂交等] [4 -5] 等。由于 DNA 较蛋白质 表 1 猪肉类罐头样晶 而言耐热性强，不依赖于组织和细胞的类型，具有更 Table 1 Canned pork samples 高的种间多态性等优点，基于以物种间基因差异为基 样品名称 样品编号 础的分子生物学鉴别方法已成为食品中动物源成分 红烧猪肉罐头 SCFF-GT-R-0005-1 云腿大片罐头 SCFF-GT-R-0011-1 鉴别的主要方法[6] 。 猪肉午餐肉罐头 SCFF-GT-R-0040 对于深加工肉制品，如罐头制品、肉干、肉骨粉 青椒肉酱罐头 SCFF-GT-R-0039