实时荧光定量RTPCR检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究.docVIP

　　实时荧光定量RTPCR检测鼻咽癌骨转移相关基因表达的研究 作者：翟晓晓，刘腾飞，姚开泰 【摘要】 目的 研究 CXCR4、CTGF、MMP1、IL11、MST1R、ETV1 6种基因在鼻咽癌细胞58F与骨共培养前后的表达情况， 分析 这些基因在鼻咽癌骨转移中的作用。 方法 采用基于SYBR GREENⅠ法的实时荧光定量RTPCR检测58F细胞与骨共培养前后骨转移相关基因的表达情况。结果 58F细胞与骨共培养后CXCR4、CTGF、MST1R、ETV1的表达水平较共培养前差异有显著性 (Plt;0.05)，均表达上调；MMP1、IL11则差异无显著性。结论 实时荧光定量RTPCR能够敏感、特异地检测出鼻咽癌细胞在与骨组织共培养前后的mRNA的表达变化，方法准确可靠，操作方便；CXCR4、CTGF、MST1R、ETV1有可能成为判断鼻咽癌骨转移的潜在标志物。 【关键词】 实时荧光定量RTPCR；骨转移相关基因；鼻咽癌 　　Abstract:Objective To pare the expressions of CXCR4, CTGF, MMP1, IL11, MST1R, and ETV1 mRNA in NPC cell line 58F and 58F cocultured RNA expression levels and the bone metastasis of NPC.Methods The mRNA expressions of six genes in NPC cell line 58F and 58F cocultured e Fluorescent Quantitative RTPCR. Results The expressions of CXCR4, CTGF, MST1R and ETV1 ay be used as a potential molecular targets for the diagnosis of bone metastasis in NPC. 　　Key e fluorescent quantitative RTPCR;bone metastasis gene; nasopharyngeal carcinoma 　　骨转移是晚期恶性肿瘤的常见并发症，近年来逐渐成为肿瘤转移机制研究领域的热点之一，在骨转移的发生过程中，由于骨组织微环境与肿瘤细胞的相互作用，使得肿瘤细胞具有特定的基因型。研究发现［1］：趋化因子受体4（chemokine receptor 4，CXCR4）、结缔组织生长因子(connective tissue groatrix metalloprotease1,MMP1)、白细胞介素11（interleukin11）是乳腺癌骨转移的标签基因；巨噬细胞刺激蛋白受体（macrophage stimulating 1 receptor,MST1R)在乳腺癌骨转移中发挥作用［2］;而ETV1 (ETS variant gene 1 )则在前列腺癌的骨转移中表达增高［3］。 　　鼻咽癌作为我国南方常见的上皮性恶性肿瘤，远处转移以骨最为常见，本研究选取较常规RTPCR更好的实时荧光定量RTPCR（real time fluorescence quantitative PCR，FQPCR）技术对目的基因在鼻咽癌细胞株与骨共培养前后的表达情况进行研究，以探讨上述6个基因在鼻咽癌骨转移中的作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞 　　鼻咽癌细胞株58F为本实验室冻存，低分化人鼻咽癌细胞株，细胞均呈上皮样，贴壁生长，生长培基为含有10％(φ)新生牛血清的RPMI1640。 　　1.2 实验动物 　　6～8周龄BALB/c裸鼠，SPF级，合格证号：SCXK（粤）2006-0015 2006B023 2006A048，体质量16～20 g，雌雄不限，购自南方医科大学实验动物中心。 　　1.3 主要试剂和仪器 　　BGJb培养基购自Invitrogen公司，RPMI1640购自Hyclone公司，胎牛血清购自杭州四季青，Trizol试剂购自Invitrogen公司，Stratagene公司的Mx3000P Real Time PCR扩增仪， PrimeScriptTM RTPCR试剂盒以及SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒购自Takara。 　　1.4 共培养实验 　　从裸鼠取前肢骨和后肢骨（包括大腿骨、胫骨、肱骨和桡骨），去除骨周围的肌肉，沿长轴切开骨干，使骨髓腔暴露，切成0.8 cm长的骨块置于含有抗生素的BGJb培养基中，37 ℃平衡24 h