家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究.docVIP

　　家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究 作者：朱孝芹，臧亚如，张欢，刘翠哲 【摘要】 　　目的 建立家兔血浆中北豆根碱（RM）的HPLC分析方法，并对RM静注给药在家兔体内药动学过程进行分析研究。方法采用乙腈、二氯甲烷沉淀蛋白质并提取药物，采用HPLC法测定。色谱柱为Discovery C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈∶水∶磷酸=16∶84∶0.15(V∶V∶V)；检测波长208 nm；柱温为室温；流速0.5 ml·min-1；动物实验使用家兔6只，采用静脉注射给药（10 mg·kg-1），进行血药浓度测定和药动学参数 计算 。结果家兔血浆内源物质对药物测定无干扰，在血药浓度0.01～0.10 mg·ml-1范围内，浓度对峰面积有良好的线性关系，r= 0.999 8，提取回收率大于85%，方法回收率在98.3%～100.5%之间；日内、日间精密度RSD均小于10%（n=5）。北豆根碱在家兔体内的血药浓度-时间曲线符合二室模型。结论该法准确、简便、灵敏，可用于北豆根碱在兔体内药动学的研究。 【关键词】 北豆根总碱； 高效液相色谱法； 家兔； 药动学 　　AbstractObjectiveTo establish an HPLC method for determination of dauricine in rabbits plasma and study the related pharmacokiics in rabbits after Ⅳ injection.MethodsAfter protEin ethane, dauricine in plasma ined on HPLC , and the mobile phase l·min-1. enispermum dauricum DC.的干燥根茎，有清热解毒、祛风止痛作用，其有效部位是生物碱，现已知北豆根中含有近二十种生物碱，总碱含量可达1%以上，其中含量最高的生物碱为RM，其含量约占总生物碱的50%左右［1］。临床及实验均证实RM有良好的抗心律失常作用，且RM延长心肌动作电位时程作用存在剂量依赖性［2］。此外，北豆根碱还有抑制动脉血栓形成［3］、抗氧化［4］、抗肿瘤等［5］作用，具有广泛的应用前景。本实验采用单剂量静脉注射给药的方法，检测北豆根碱在家兔体内的血药浓度，应用3p87软件计算药动学参数。 　　 1 仪器与试药 80-2B型台式离心机；802B型台式离心机；LG16色谱工作站，日本）；北豆根饮片，市售，承德产，经鉴定为蝙蝠葛；北豆根碱，对照品，自制（含量99.0%）；无水甲醇、磷酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯。 　 　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 　　色谱柱为Discovery C18柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为乙腈∶水∶磷酸=16∶84∶0.15(V∶V∶V)；检测波长208 nm；柱温为室温；流速0.5 ml·min-1。 　　2.2 对照品储备液精密称取北豆根碱对照品(60℃干燥至恒重)5.0 mg置25 ml容量瓶中，用流动相溶解并定容，作为对照品储备液。 　　2.3 样品处理方法［6］ 　　精密吸取家兔血浆1 ml，加乙腈0.5 ml，二氯甲烷4 ml，旋涡混合5 min， 3 000 r·min-1离心15 min，将有机相转入10 ml离心管中，剩余水相再加入二氯甲烷2 ml，同法萃取并离心，合并2次萃取液，40℃水浴，N2吹干，残渣用流动相0.2 ml定容，充分溶解后，16 000 r·min-1离心5 min，取上清液20 μl进样。 　　2.4 标准曲线的制备取空白血浆1 ml置离心管中，加入北豆根碱对照品溶液，使其浓度分别为0.01，0.02，0.03，0.04，0.06，0.08，0.10 mg·ml-1，按“样品处理方法”项下操作，以RM峰面积对RM血药浓度进行回归，其回归方程为： Y = 1.53 ×108X + 1.8×103，r = 0.999 8(n=7) ，线性范围为0.01～0.1 mg·ml-1。 　　血浆样品典型色谱图见图1～3。 　　2.5 回收率测定分别取空白血浆1 ml，准确加入北豆根碱对照品溶液，配制高中低3个浓度的血浆样品，按“样品处理方法”项下操作，使其最终浓度为0.01，0.06，0.1 mg·ml-1，同时配制相同浓度的北豆根碱对照品水溶液进行测定，每个浓度测定5次。 计算 提取和方法回收率。结果见表1。表1 RM血浆样品回收率壹（略） 　　2.6 精密度测定将高、中、低浓度的对照品血浆分别进行日内精密度和日间精密度测定。结果见表2。表2 RM血浆样品的日内和日间精密度（略） 　　2.7