利用GUS基因瞬时表达对大豆子叶节和胚尖转化方法的比较及优化.pdfVIP

2008年第43卷第12期 生物学通报 35 利用GUS基因瞬时表达对大豆子叶节 和胚尖转化方法的比较及优化宰 刘 栋 石 强 李鹏丽 王宁宁” (南开大学生命科学学院植物生物学与生态学系 天津 300071) 摘要 建立了一个综合利用CaMV35S：：GUS基因的瞬时表达水平、表达位点和表达率来 评价大豆转化效率的检测体系，并利用该体系对分别以栽培大豆(Glycinem勰L．)“科丰6 号”、“合丰35”、“中黄13”和“垦农18”的子叶节和胚尖为外植体的农杆茵介导的2种不同转 化方法进行了比较和优化。实验结果表明，不同的转化方法对大豆的品种要求不同，“科丰6 号”和“合丰35”2个品种适合子叶节转化法．而“中黄13”更适于胚尖转化法。大豆萌发培养 基和共培养基对转化频率的影响存在交互作用。低6一BA的萌发培养基和高6一BA的共培养 基配合、或者高6一BA的萌发培养基和低6一BA的共培养基配合使用适合“科丰6号”子叶节 转化法，而“中黄13”胚尖转化法要求萌发培养基和共培养基中的6一BA浓度都较高。另外，在 d 子叶节转化系统中，6d苗龄的子叶节共培养3 GUS基因的瞬时表达率较高。而在胚尖转化 系统中大豆的萌发时间对GUS基因的瞬时表达率并没有显著的影响．胚尖与农杆茵共培养较 宜的时间为5d。 关键词 大豆 子叶节转化 胚尖转化 GUS瞬时表达 中国图书分类号：Q943．2文献标识码：B max 可以使转化效率提高到9．4％。26．2％。这是目前 L．)是全球公认的难转化作 大豆(Glyeine 物之一。自1988年MeCabeE1]和Hinehee[23分别用基农杆菌介导大豆子叶节系统转化最为成功的报 因枪轰击大豆未成熟胚生长点和用农杆菌侵染大 告。但由此转化系统获得的转化植株嵌合体较多， 豆子叶节的方法获得大豆转基因植株以来．大豆转 后期筛选工作量较大．近年来Liu等…用成熟大 化效率一直没有显著性的提高。目前应用于大豆遗 豆种子的胚尖做外植体进行遗传转化的研究并获 传转化的方法主要有根癌农杆菌介导法、基因枪 得成功，其胚尖的再生效率高、芽形成快、高效转 法、真空抽滤法和花粉管导入法[，]等，但其中获得 化且无坏死现象，因此可能会成为今后大豆转化 较为广泛应用的只有根癌农杆菌介导法和基因枪 的主要方法之一。以上用子叶节和胚尖做外植体 法。农杆菌介导的大豆遗传转化虽然转化效率很低 进行大豆转化都经历了组织培养的过程，最近，马 并有较强的基因型依赖性．但与其他方法比起来具 丽萍等…报告了一种快速、高效的大豆农杆菌转 有经济、操作简单、能够准确、完整地将T—DNA以化技术。即用子叶节和胚尖相结合的方法获得外 单拷贝或低拷贝的形式插入到受体基因组中等优 植体。在共培养后不需要组织培养过程就可以再 点，因此仍然是大豆遗传转化的首选方法。 生出转化植株。 在诸多农杆菌介导的大豆遗传转化成功的报 由于不同的大豆品种对栽培地点的诸如光周 告中受体材料多为子叶节，这一系统由Cheng等…期、温度、湿度以及土壤肥力等生态气候条件和栽 用无菌苗子叶节首次报告成功再生植株。而农杆 培条件的适应能力不同。因此基于不同目的的基 因工程技术的成功应用依赖于对相应大豆品种的 菌成功转化大豆的首例是Hinchee等[2]利用Peking 无菌苗子叶节为外植体获得的，之后Olhoft等【5]㈣选择，而目前人们对各种高转化率研究报告中所 报告在共培养基中添加L一半胱氨酸等抗氧化剂 使用的转化方法是否适用于所有大豆品种还缺乏 }·通讯作者 万方数据