如何提取小小的miRNA.PDFVIP

如何提取小小的miRNA？ 近年来，microRNA （miRNA ）成了生命科学和医学研究中的明星。这种22 个核苷酸的小分子 在基因表达调控中起着至关重要的作用，它似乎掌控着多把开启科学之门的钥匙，例如发育、分化 和凋亡。而它又与多种癌症和疾病息息相关。正因为它是如此重要，大家都迫不及待地想把它看清 楚。miRNA 相关的技术和工具也越来越多，生物通就先来谈谈其中最基本的工具——miRNA 的提 取。 无论是芯片分析，还是miRNA 的克隆， 还是只纯化小分子RNA。如果你想要用芯片 miRNA 的提取都是最基础的步骤。以往传统 做miRNA表达图谱研究，我们还是建议你先 的RNA 提取试剂盒都是为了回收mRNA 而 纯化总RNA，再用胶纯化富集miRNA，这样 设计的，往往会弃去较小的RNA 分子以提高 做似乎麻烦了一些，但它能准确地定量RNA， mRNA 得率，而这些步骤会导致miRNA 的损 并评估它的质量，来确认是否能用于芯片分 失。多数RNA 纯化试剂盒采用标准的玻璃纤 析。纯化总RNA的步骤就与一般的RNA纯化 维滤膜或者硅胶滤膜，不能有效地回收小分子 类似。而纯化小分子RNA则多了一步：先用 RNA。不过，为了顺应市场的需求，各大公 25% 的乙醇将大的RNA固定住，小分子RNA 司纷纷推出miRNA 提取产品。 以滤出液形式收集，然后将乙醇浓度提高到 55%，把小分子RNA固定住，最后是洗涤和 不同的样本有不同的试剂盒相对应。细 洗脱，就可以富集200nt 以内的RNA片段。它 胞、组织这种最常见的样本当然有多种试剂盒 的价格是3630 元，能纯化约40 次，单次价 可用，不过血液、FFPE 样本也不用担心。生 格在90 元。 物通来为你一一介绍。 核酸提取一贯是QIAGEN公司的绝活，对 Ambion 的mirVana miRNA Isolation Kit 于miRNA这样的小分子，QIAGEN 自有妙招。 是最早上市的miRNA提取试剂盒，也是应用 它推出了miRNeasy Mini Kit，能从多种动物 最广的，查阅miRNA的相关文献，很多都用 组织和细胞中纯化miRNA和总RNA。这个kit 了Ambion 的这个kit。它采用改良的玻璃纤维 也是结合了基于酚/胍的样品裂解和经典的硅 滤膜方法来快速回收细胞或者组织样本中全 2 7 胶膜离心柱，配上优化好的各种buffer，只要 部RNA，包括miRNA。样品量为10 -10 个细 RNA大于18nt，就能照单全收。最大样品体 胞，或者0.5-250mg组织。首先用变性裂解 积为107个细胞，或50mg组织（脂肪组织可 液裂解样品，让RNase失活，使RNA稳定。 以达100mg）。这个kit的价格就相对更平易 裂解液随后用酸-酚：氯仿来萃取，去除大部