广西长寿地区人群白细胞DNA总体甲基化水平研究.docVIP

　　广西长寿地区人群白细胞DNA总体甲基化水平研究 作者：张志勇 李春宏 仇小强 农清清 何敏 覃健 蒋贵发 黄明立 【摘要】 目的 比较广西长寿地区巴马县人群与一般地区人群的白细胞DNA总体甲基化水平，探讨长寿与DNA甲基化之间可能存在的关系。方法 (1)在巴马县长寿村落抽取健康个体199人组成实验组，另抽取与实验组年龄性别相匹配的个体163人组成对照组。(2)取研究对象外周血2 ml，分离白细胞、提取DNA，用高效液相色谱法检测其中胞嘧啶(dC)和5甲基胞嘧啶(5dmC)浓度， 计算 5dmC/(dC+5dmC)比值，以比值代表研究对象总体甲基化水平。结果 (1)对照组和实验组研究对象的总体甲基化水平都呈增龄性下降，下降速率分别为-0.874 3和-1.151 7，年龄与甲基化比值呈负相关，相关系数分别是-0.480和-0.639；(2)实验组人群DNA总体甲基化水平比对照组的高(P＜0.001)；分年龄组段比较，在10～、20～、40～、50～、60～年龄段，实验组人群的甲基化水平高于对照组(P＜0.05)。 结论 巴马县人群长寿与其DNA总体甲基化水平较高可能有一定的关系。 【关键词】 巴马县；长寿；DNA总体甲基化水平 【Abstract】Objective To pare the total methylation level of the leukocytes from persons living in the longevity district Bama county of Guangxi province general district, and study possible relationship betethylation. Methods 199 healthy individuals in the longevity villages of Bama l vEin blood the subjects to extract DNA and then detect the concentrations of the dC and 5dmC C/(dC+5dmC) ethylation level. Results The total methylation level declined C/(dC+5dmC) value (r=-0.506 2 and -0.666 6 respectively). The total methylation level of the case group C/(dC+5dmC) value in case group a county and thEIr higher total DNA methylation level. 【Key a County; Longevity; DNA total methylation level 　　衰老是由一系列基因激活和阻抑及其通过各自表达产物相互作用的结果。DNA甲基化是有核细胞特有的复制后修饰，与肿瘤、遗传病、自身免疫性疾病、衰老的发生密切相关〔1〕。研究表明多数动物的组织或器官基因组中5甲基胞嘧啶(5dmC) 含量随年龄增加而下降〔2〕，C含量随培养代数增加而降低，说明DNA甲基化程度与细胞寿命有关。Golbus等〔4〕发现36岁以上组人群T细胞基因组中5dmC含量较35岁以下组低约11%，且下降速度存在个体间的差异 〔5〕。以上研究说明基因组DNA甲基化水平降低的趋势在衰老中普遍存在的。 广西巴马县是世界知名的长寿之乡，人群长寿现象自古有之，据全国第五次人口普查，全县共有百岁老人74名，占总人口的31/105，90岁～99岁老人173人，占总人口的75/105，本研究旨在探讨巴马县人群DNA总体甲基化水平，以揭示DNA甲基化与人类长寿之间可能存在的关系，为长寿机制的研究提供更多的线索。 　　 1 材料与方法 　　1.1 对象 　　用非概率抽样法在巴马县长寿村落抽取健康个体组成实验组，其年龄的判别除了身份证外，还辅予社会学调查、家系调查等；以成组匹配的方法在我校附属 医院 接受例行健康体检的健康人群中选择与实验组年龄性别相匹配的对象为对照组。以上两组的研究对象均经常规的体格检查,患有肿瘤、自身免疫性疾病、慢性病及其他衰老相关性疾病等个体不纳入本研究范围。 　　1.2 试剂及仪器 　　脱氧胞苷、5甲基脱氧胞苷、核酸酶T1 、核酸酶A 、核酸酶P1等试剂购自Sigma公司；所用溶液包括30 mmol/L pH5.2醋酸钠溶液、20 mmol/L硫酸锌溶液、20 mmol/L pH4.1磷酸氢二铵溶液、10%(v/v)甲醇溶液、40%(v/v)甲醇溶液、四氢呋喃溶液。所