康艾注射液中黄芪甲苷的含量测定方法研究.docVIP

　　康艾注射液中黄芪甲苷的含量测定方法研究 作者：赵宏峰，解生旭，韩冬，司云珊，徐雅娟 【摘要】 　　目的：建立康艾注射液中黄芪甲苷的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，用Hypersil C18 5μm(4.60×250 mm)柱；乙腈—水(32∶68)为流动相；蒸发光散射检测器；流速为1.0 mL/min。结果：黄芪甲苷在6.36～14.84 μg之间与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9992)，平均回收率为98.0%。结论：该方法简便、准确、重现性好，可作为该制剂的质量控制。 【关键词】 康艾注射液 黄芪甲苷 色谱法 高压液相 　　康艾注射液是由黄芪、人参、苦参素3味药物组成、采用 现代 提取分离技术精制而成的中药注射剂，具有益气扶正，增强机体免疫功能的功效，在临床上用于原发性肝癌、直肠癌、恶性淋巴瘤、妇科肿瘤以及各种原因引起的白细胞低下及减少症和慢性乙型肝炎的 治疗 。方中黄芪为君药，黄芪甲苷为其主要有效成分之一，我们采用高效液相色谱法测定康艾注射液中黄芪甲苷含量，作为制剂质量控制指标，方法如下。 　　 1 实验材料 　　1.1 仪器 岛津2010C型高效液相色谱仪(日本)；奥泰2000ES蒸发光散射检测器(美国)；N2000色谱数据工作站(浙江大学)；AG245 电子 分析天平(瑞士)；KQ250B超声波清洗器(昆山市超声波仪器厂)。 　　1.2 试药 乙腈(色谱纯，美国Fisher；甲醇(分析纯，北京化工；正丁醇(分析纯，北京化工；氨水(分析纯，北京化工；医用酒精;水为蒸馏水；D101型大孔吸附树脂(山东济宁抗生素厂)；黄芪甲苷(含量测定用, 中国 药品生物制品检定所 7549406)，康艾注射液(长白山制药股份有限公司提供，批号：060701，060702，060703，060704)。 　　 2 实验方法 　　2.1 色谱条件 色谱柱为Shimpack VPODS柱(250×4.60 mm,5 μm)；乙腈—水(32∶68)为流动相；流速：1.0 mL/min； 蒸发光散射检测器参数：漂移管温度100℃，载气流速2.8 L/min；柱温：35℃；理论板数按黄芪甲苷峰 计算 应不低于4 000。 　　2.2 对照品溶液的制备 取黄芪甲苷对照品适量，精密称定2.0 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含0.2 mg黄芪甲苷的对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 取本品10支，倾出内容物，混匀，精密量取10 mL，于水浴上蒸干，残渣加甲醇使溶解，并定量转移至5 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。 　　2.4 线性关系的考察 精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.194 mg的溶液，精密吸取此溶液5、10、15、20、25 μL，注入液相色谱仪，依法测定，以黄芪甲苷进样量的对数值为横坐标，色谱峰峰面积的对数值为纵坐标，绘制标准曲线。结果表明，黄芪甲苷在0.97～4.85 μg范围内，进样量与峰面积呈良好的线性关系，回归方程为Y=5.3465+1.7266X，相关系数r=0.99989。 　　2.5 精密度的测定 取康艾注射液(批号：060701)，按2.3项下方法制备供试品溶液，精密吸取20 μL，重复测定5次，测定黄芪甲苷的峰面积值，结果RSD=0.78%，表明本测定系统精密度良好。 　　2.6 稳定性试验 取康艾注射液(批号：060701)供试品溶液，精密吸取20 μL，分别于放置0、2、4、6、24 h进样，测定黄芪甲苷的峰面积值，结果RSD=0.53%，表明本品供试品溶液在室温放置24 h内能保持较好的稳定性。 　　2.7 重现性试验 取康艾注射液(批号：060701)，按2.3项下方法制备5份供试品溶液,分别精密吸取20 μL，注入液相色谱仪，依法测定，计算黄芪甲苷含量，平均含量为0.616 mg/支，RSD=2.29%。 　　2.8 加样回收率测定 精密量取已测知含量的康艾注射液(批号：060701；含量：0.0592 mg/mL)样品5 mL，5份，分别精密加入黄芪甲苷对照品0.3 mg后，按2.3项下方法进行操作，依法测定， 计算 回收率，结果平均回收率为98.00%，RSD为1.50%。 　　2.9 阴性试验 取按处方比例除去黄芪的阴性样品，采用完全相同的制备方法制备成阴性样品溶液，依法测定。从色谱图可知，在黄芪甲苷峰保留时间处无任何色谱峰，表明阴性对照无干扰。 　　2.10 样品含量测定 分别精密吸取对照品溶液各10、20 μL和供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，依法检测，外标两点法计算，测定3批康艾注射液中黄芪甲苷的