RNA干扰和siRNA转染的实用.pptVIP

RNAi和siRNA转染 Dr.Jim Engreen Biosystem Co.Ltd. 内 容 第一部分 RNAi实验基本概念 第二部分 RNAi实验具体设计 第三部分 siRNA转染过程相关问题及解答 第一部分RNAi实验基本概念 主要内容 1.RNAi的概念 2.RNAi的启动途径 3.非哺乳动物系统的RNAi实验 4.哺乳动物系统的RNAi实验 5.RNAi效应表现 1.RNAi的概念 RNA干扰(RNA interference)是双链RNA（dsRNA)特异性地结合到与之序列互补的mRNA上，导致mRNA降解，从而介导的转录水平基因表达抑制。 2.RNAi的启动途径 (1) dsRNA途径 (2) siRNA途径 (3) shRNA表达载体途径 (1) dsRNA途径 dsRNA:在非哺乳动物系统中，大于30bp的长双链RNA(dsRNA)进入细胞后，经过胞质内双链特异性核酸酶Dicer水解成21-23bp的siRNA，进一步导致RNAi的发生。 但在绝大多数哺乳动物系统中，超过30bp的dsRNA会引起细胞潜在的抗病毒机制（干扰素效应）。 (2) siRNA途径 小干扰RNA，长21-23bp，双链。 作用机制：双链的siRNA解链并装配入RNA介导的静默复合物(RISC)，siRNA的反义链引导RISC与mRNA分子互补结合，并降解mRNA，最