基于共聚焦显微拉曼的真菌菌丝中几丁质的原位检测.pdfVIP

第３６卷 ，第１期 光 谱 学 与 光 谱 分 析 Vol.３６ ，No.１ ， １１９‐１２４ pp ２ ０ １ ６ 年 １ 月 Spectroscopy and Spectral Analysis January，２０１６ １ １ １ ２ １ １ * ， ， ， ， ， １. 浙江大学生物系统工程与食品科学学院，浙江 杭州 ３１００５８ ２. 浙江大学农业试验站，浙江 杭州 ３１００５８ 几丁质是真菌细胞壁中一种重要的结构多糖，本文首次采用共聚焦显微拉曼技术对山茶刺盘孢菌 的气生菌丝进行原位检测研究，首先确定了采集菌丝拉曼光谱的最优实验参数，并获得了菌丝，几丁质标准 品和背景三种物质的典型拉曼光谱，对其中的特征峰进行归属分析，发现菌丝光谱中有明显的几丁质特征 峰。 然后对置于载玻片上菌丝的感兴趣区域进行拉曼光谱面扫描，通过主成分分析法发现面扫描区域中，菌 丝和背景两种信号可以明显区分开来，结合主成分的载荷因子图得到了菌丝的两个主要的特征差异峰１ ６２２ - １ - １ - １ 和１ ３６８ cm ，１ ６２２ cm 属于菌丝中几丁质的特征峰，而１ ３６８ cm 是来源于菌丝中的果胶多糖。 最后通 - １ 过对几丁质在１ ６２２ cm 特征峰波段附近范围积分，绘制了几丁质在菌丝中二维和三维的化学成像图，直 观且无损的再现了几丁质在菌丝中的空间分布。 几丁质；真菌菌丝；共聚焦显微拉曼；主成分分析；化学成像 ：O６５７.３ ：A DOI ：１０.３９６４／.issn.１０００‐０５９３（２０１６）０１‐０１１９‐０６ j 结合，它不仅具有常规拉曼光谱快速无损、 样品需求量小， 引 言 无需预处理等显著特点，辅以高倍光学显微镜，还能对微观 物体进行高空间分辨率（＜ １ m）的信号采集。 随着空间分辨 μ 植物真菌病害是危害农业生产的主要病害，发病率高 率的不断提高，使得拉曼光谱对单个细胞的研究成为可能， ［１］ （７０％ ～ ８０％ ），病害种类最多，造成的损失也最大 。 真菌 因此近几年在微生物学方面的研究也已有涉足，如白腐菌及 ［８］ ［９］ 感染农作物的过程，事实上是真菌与作物的一个互相影响的 其代谢产物的研究 ，酿酒酵母 的分类鉴别，微量元素对