热应激对剑尾鱼hsp70家族两成员基因表达的影响.pdfVIP

维普资讯 第 13卷第 6期 中 国 水 产 科 学 V01．13 No．6 2006年 11月 JournalofFisherySciencesofChina November 2006 热应激对剑尾鱼HSP70家族两成员基因表达的影响 万文菊 ，2一，石存斌 ，王纪亭2，柴同杰2，吴淑勤 (1．中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东广州 510380；2．山东农业大学 动物科技学院，山东 泰安 271018；3．泰山 医学院，山东 泰安 271000) 摘要：采用RT-F~R方法扩增实验动物剑尾鱼 ( D zhel／eH)纯系RR-B的I-ISP70家族两个成员的cDNA片段 ，并将 其克隆到PMD18一T载体中测序，将测序结果与GenBank中的核苷酸序列和推导的氨基酸序列进行同源性比较。同时利用 RT-F~-R半定量方法研究热应激时两个成员在剑尾鱼组织中的表达。通过克隆获得了剑尾鱼的I-ISP70家族两个新成员的 cDNA片段 ，两序列均包含HSP70家族 的特征性签名序列和热休克蛋 白的定位序列；通过对克隆片段与已发表的青锵 (0b妇sa／tipes)等鱼类 I-ISP70的核苷酸序列和其编码的氨基酸序列同源性比较 ，发现核苷酸序列同源性较高，成员一和成 员二分别为85％～89％和82％--99％；氨基酸序列同源性更高，成员一和成员二分别为97％--99％和93％～99％。一般 条件下，两成员在剑尾鱼肝脏、脾脏、肾脏和心脏中不表达，但热应激能刺激成员一在剑尾鱼脾脏中表达，成员二在肝脏、脾 脏、肾脏和心脏中强烈表达，并可能在参与热应激保护方面起更大作用。[中国水产科学，2006，13(6)：929—935] 关键词：HSP70；热应激；剑尾鱼；克隆；基因表达 中图分类号：Q959．475 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2006)06—0929—07 热应激蛋白(HSPs)是生物体内与抗逆相关的 中国首个通过审定的鱼类实验动物，填补了国内无水 一 类十分重要的蛋 白，作为一种在进化过程中有高 生纯系实验动物的空白E6]。实验证明，经过培育的水 度保守性的应激蛋 白，对维持机体的自身稳定性起 生实验动物剑尾鱼，在水环境污染监测、水中化学物 着重要作用。除高温诱导外，许多损伤因素、应激刺 质的生物积累、生物医学以及药物评价等多个研究领 激(如缺氧、重金属离子、病毒感染、DNA损伤、自由 域扮演着重要角色_7j。但是，有关剑尾鱼热应激基因 基)都可以导致细胞发生热休克反应[卜 ，从而诱 及其蛋白的研究，目前尚未见报道。 导热休克蛋 白的合成L3j。HSPs是最保守的蛋 白之 本研究以剑尾鱼RR—B系标准化实验动物为研 一 ， 如大肠杆菌的HSP70与人的HSP70有 50％的 究对象，克隆剑尾鱼的两个 HSP70家族成员 cDNA 同源性_4j。近来研究表明，HSP70不仅是分子伴 的部分序列，并且在热应激对两成员在剑尾鱼组织 侣，而且是细胞因子，在人的单核细胞 中诱导强有力 中表达方面进行较详细的研究，旨为开展与抗逆相 的前炎症反应 【。 关的一些研究奠定基础。 剑尾鱼 (xp／ho~ hele／r／)属花锵科、剑尾鱼 1 材料与方法 属，是一种热带淡水小型鱼类。其体形小、食性杂，便 于在实验室内饲养管理，并且繁殖周期短、繁殖力强， 1．1 剑尾鱼总 RNA提取 可在较短时间内获得大量个体，符合实验动物培养对 剑尾鱼RR—B系，体长 5～7cm，体质量2．0～ 象的必要条件。中国水产科学研究院珠江水产研究 4．0g，为中国水产科学研究院珠江水产研究所培 所经过十几年对剑尾鱼水生实验动物化相关问题的 育。根据有关研究证明，可诱