柴胡及其煎剂中皂苷类成分的高效液相指纹图谱研究.docVIP

　　柴胡及其煎剂中皂苷类成分的高效液相指纹图谱研究 【摘要】 目的利用HPLC指纹图谱技术，全面揭示柴胡煎煮前后皂苷类成分的变化。方法采用Hypersil C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 - 水, 梯度洗脱 [0 ～ 70 min: 乙腈 - 水 (22∶78) → (50∶50) ]; 流速1.0 ml·min-1;柱温30 ℃;检测波长210，252 nm。 结果柴胡煎煮后的指纹图谱中出现了9个药材中不存在的新色谱峰。 结论对柴胡煎煮中新出现的皂苷类成分进行深入系统的研究，将有助于从中医角度揭示中药柴胡功效的物质基础。 【关键词】 柴胡; 煎剂; 柴胡皂苷; 高效液相色谱; 指纹图谱 　　Abstract：ObjectiveTo disclose the changes of saikosaponins beted on a Hypersil C18 column (250 mm × 4.6 mm, 5 μm) in：Acetonitrile - in-1, the column temperature . ResultsNine peaks po chinense DC.的干燥根。乙腈(迪马公司，色谱纯)，屈臣氏蒸馏水，AB-8型大孔吸附树脂(天津南开大学化工厂)，其它试剂均为分析纯。 　　 2 方法与结果 　　2.1 供试品溶液的制备 　　2.1.1 柴胡煎剂中皂苷类成分[4]取适当粉碎的柴胡药材20 g，10倍量水煎煮2次，1 h/次，趁热过滤，合并滤液，水浴浓缩，最后定容至50 ml量瓶中。取2.5 ml上述浓缩液(折合生药材1.0 g)，上样于装有10 ml大孔吸附树脂的层析柱，进行动态吸附，待吸附完毕后，先用体积分数为5% 的NaOH 水溶液50 ml洗脱，弃去;然后用水洗脱至流出液为中性;再用体积分数为30% 的乙醇溶液50 ml洗脱，弃去;最后用体积分数为95%的乙醇溶液160 ml洗脱，收集体积分数为95%的乙醇溶液洗脱部分，于水浴上浓缩至干，用体积分数为50%的乙醇定量转入10 ml量瓶中，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.1.2 药材中皂苷类成分[5]取柴胡药材粗粉1.0 g，精密称定，置于具塞三角瓶中，加入体积分数为5%的氨性甲醇溶液50 ml，浸润30 min，超声1 h，用甲醇补足至原重，静置，吸取上清液25 ml，置于蒸发皿中，于水浴上浓缩至干，用甲醇定量转移至5 ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，经0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。 　　2.2 色谱条件[6]大连伊利特Hypersil C18色谱柱(250 mm × 4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈- 水, 梯度洗脱 [0～70 min, 乙腈- 水(22:78) →(50:50)]; 流速1.0 ml·min-1;柱温30 ℃;检测波长210，252 nm;进样量20 μl。按照此色谱条件得各供试品溶液色谱图。见图1。 　　2.3 稳定性实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h进样，记录指纹图谱。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰的保留时间和峰面积无明显变化，RSD分别为0.58%～1.13%，0.32%～1.21%(210 nm)和0.65%～1.50%，0.23%～1.45%(252 nm)。说明供试品溶液在12 h之内稳定。 　　2.4 精密度实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，重复进样6次，记录指纹图谱。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰保留时间和峰面积无明显变化，RSD分别为0.33%～1.39%，0.56%～1.55%(210 nm)和0.70%～1.93%，0.51%～1.43%(252 nm)。说明仪器精密度良好。 　　2.5 重复性实验取洛阳嵩县柴胡药材适量，精密称定，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液6份，记录色谱图。结果表明，柴胡药材及其煎剂的各主要色谱峰保留时间和峰面积的RSD为0.62%～1.01%，1.13%～2.38%(210 nm)和0.63%～1.36%，0.86%～1.83%(252 nm)。说明重复性良好。 　　a 柴胡煎剂 (210 nm);b 柴胡药材 (210 nm); 　　c 柴胡煎剂 (252 nm);d柴胡药材 (252 nm) 　　图1 柴胡煎剂及药材的指纹图谱 　　2.6 样品测定取不同产地的柴胡药材(洛阳嵩县、山西太原、辽宁沈阳、河北承德)，分别混合均匀，按照“2.1”项下方法制备各供试品溶液，并记录指纹图谱。对不同产地的柴胡药材比较其煎煮前、后的皂苷类成分的指纹图谱，发现煎煮后出现了大量药材中不含有的