氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究.docVIP

　　氯沙坦对糖尿病大鼠肾组织细胞外基质基因表达影响的研究 作者：魏明 李素娟 佘红纯 卢永申 【摘要】 目的 探讨氯沙坦对糖尿病(DM)大鼠肾组织细胞外基质转化生长因子β1(TGFβ1)、纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(ColⅣ)mRNA表达的影响。方法 48只大鼠分为对照组;DM组：链脲佐菌素(STZ)70 mg/kg腹腔注射;氯沙坦干预组(氯沙坦组)：氯沙坦30 mg·kg-1·d-1灌胃，检测各组在2、4、8 RNA表达。结果 DM组和氯沙坦组中TGFβ1，ColⅣ和FN mRNA的表达显著高于对照组(均Plt;0.01);氯沙坦组TGFβ1 mRNA在4、8 RNA表达的作用进行研究，以期进一步探讨其可能的作用机制。 　 　1 材料与方法 　　1.1 动物分组和模型建立 SD大鼠30只(体重160～180 g，雌雄各半)，购自郑州大学医学实验动物中心，随机分为3组，每组10只：正常对照组(对照组);DM组：链脲佐菌素(STZ，Sigma公司)70 mg/kg腹腔注射，48 h后尾静脉采血测定血糖≥16.7 mmol/L者确定为DM大鼠;氯沙坦干预组(氯沙坦组)：DM模型确定后第2天给予氯沙坦30 mg·kg-1·d-1灌胃，对照组和DM组给予等量的生理盐水灌胃，实验期间所有大鼠自由饮水，标准饲料不使用胰岛素和其他降糖药。 　　1.2 标本采集和检测 于实验第2、4、8 in离心5 min分离血清，用美国BeckmanCoulter公司CX9全自动生化分析仪检测血糖、尿素氮、肌酐。肾脏肥大指数以肾重/体重(g/kg)比值表示。留取肾脏标本用生理盐水漂洗后，保存于液氮中待提取总RNA。 　　1.3 引物设计和RTPCR检测 取肾皮质100 mg加液氮研碎后，用Trizol(美国Gibco公司)提取总RNA。根据A260/A280值 计算 RNA的浓度和纯度。TGFβ1 mRNA上游引物为：5′AATACGTCAGACATTCGGGAAGCA3′，下游引物为：5′TCCACCACCCTGTTGCTGAC3′，扩增产物为498 bp，GAPDH上游引物为：5′ACCACAGTCCATGCCATCTA3′，下游引物为：5′TCCACCACCCTGTTGCTGAC3′,扩增产物为498 bp;Col Ⅳ mRNA上游引物为：5′GTGCGGTTTGTGAAGCACCG3′，下游引物为：5′GTTCTTCTCATGCACACTTC3′，扩增产物为363 bp;GAPDH上游引物为：5′CATGGTCTACATGTTCCAGT3′，下游引物为：5′GGCTAAGCAGTTGGTGGTGC3′，扩增产物为505 bp;FN mRNA上游引物为：5′CAGTTTGTGGAAGTGACCGA3′，下游引物为：5′TGGAGGTTAGTGGGAGCATA3′，扩增产物为272 bp，GAPDH上游引物为：5′ACCACAGTCCATGCCATCAC3′，下游引物为：5′TCCACCACCCTGTTGCTGTA3′，扩增产物为349 bp(以上 　　引物有上海生物工程公司合成)。PCR按逆转录二步法试剂盒(Invitrogen)进行操作，反应参数为：94℃ 60 s，58℃ 60 s，72℃ 120 s，共30个循环，产物用2%琼脂糖凝胶电泳，EB染色，并在UVP凝胶成像系统分析电泳带灰度。 　　1.4 统计学处理 计量资料用x±s表示，组间差异比较采用单因素方差分析，使用SPSS11.0统计软件进行统计描述。 　 　2 结 果 　　2.1 各组大鼠基本资料比较 实验第2、4、8周后，DM组血糖、尿素、24 h尿白蛋白、血肌酐均高于对照组差异显著(Plt;0.05)，而体重低于对照组(Plt;0.01);氯沙坦组尿白蛋白排泄虽能缓解，但尚不能恢复正常水平(Plt;0.01)。氯沙坦 治疗 后对其他指标无明显影响，DM组和氯沙坦组血糖水平无明显差异(P gt;0.05)，见表1。 　　2.2 RTPCR检测肾皮质ColⅣ、FN和TGFβ1 mRNA的表达 在各组观察时间点DM组和氯沙坦组TGFβ1、FN和ColⅣ mRNA均高于对照组(Plt;0.01或Plt;0.05);在4、8 RNA均低于DM组(Plt;0.05)，见表2。表1 各组大鼠一般参数比较表2 各组肾组织ColⅣ、TGFβ1 mRNA的表达比较与对照组比较：1)Plt;0.05，2)Plt;0.01;与DM组比较：3)Plt;0.05 　　3 讨 论 　　有实验〔1〕研究表明，TGFβ1可刺激培养的近端肾小球肾小管上皮细胞合成外基质，并可抑制细胞外基质降解酶的合成，使细胞外基质分