植物组织培养培养基.doc

植物组织培养培养基 植物组织培养是将植物器官，组织，细胞或原生质体等外植体材料无菌培养下在人工培养基上，在适当条件下诱发长成完整植株的一种技术。 植物组织培养包括：非试管微组织快繁，试管组织培养2类方法。 非试管微组织快繁 将外植体（一般要求带一叶一芽）放置在室内外普通沙质培养基上进行培养，利用植物腋芽自然倍增达到快速繁殖的目的。一般植物7-15天可以长出根系。此技术投资低，操作环节少 试管组织培养 将外植体放置在试管等器皿中在无菌的条件下进行组织培养获得试管苗 植物组织培养理论基础：细胞全能性。 优点：1.周期短，便于人工控制培养条件。繁殖速度快，经济效益高。 2.占用空间小，不受地区，季节限制。 3.繁殖珍稀。濒危苗木和突变体，是优良品种培育的有效途径。 4.利于保持原来品种的特性。 接种室及培养室： 一．培养基的组成、配制与灭菌 培养基（medium）是植物组织培养的重要材料，是外植体生长的营养物质，只有配制出适宜的培养基，才能使组织培养获得成功。 通常植物组织培养所用培养基包括以下六大类成分，即矿质营养、有机成分、植物生长调节剂、碳源、琼脂以及其他附加物等。 培养基的主要指标是营养成分及植物生长调节物质的浓度。 （一）矿质营养： 矿质营养又称无机营养，是指植物生长发育所需要的各种化学元素。 矿质元素的生理作用： （1）组成各种化合物，成为结构物质； （2）构成特殊物质，参与代谢； （3）维持离子平衡、胶体稳定及电荷平衡等电化学作用； （4）影响形态发生和组织、器官的建成等 根据植物对元素的吸收量，可以把植物必需元素分为大量元素和微量元素。 国际植物生理学会建议将植物所需浓度大于0.5 mmol/l的的元素称为大量元素。低于0.5 mmol/l的元素称为微量元素。 大量元素 包括C、H、O、N、P、K、Ca、Mg、S。其中C、H、O为气体元素，其余六种为矿质元素，分别占植物干重的百分数为18％、10％、70％、0.3%、0.07％、0.3%、0.3 ％、0.07%、0.05％。 微量元素 包括Fe、B、Mn、Zn、Mo、Cu、Co、Cl等。 1、大量元素： 组织培养中，各种矿质营养主要从培养基中获得，N、P、K、Ca、Mg、S等6种大量元素依靠各种无机盐提供。 不同植物种类和不同试验目的对元素的使用量要求不同，需经试验确定。 目前已选择出多种培养基配方用于植物组织培养。其中以MS应用最广泛。 以MS为例6中矿质元素分别由KNO3、NH4NO3、KH2PO4、MgSO4.7H2O、CaCl2 . 2H2O提供。 大量元素中的氮通常采用硝态氮或铵态氮的形式被使用，但铵态氮浓度过高会对有些植物培养物造成伤害，不适宜使用过高的浓度。而常用MS培养基中既有硝态氮又有铵态氮。 2、微量元素： 植物组织的对其需要量极少，过多会产生毒害，如造成蛋白质变性、酶系失活。代谢障碍等。 各种微量元素均具有特定的生理功能，如硼与蛋白质的合成及糖类的运输有关；铜能促进离体根的形成；锰参与植物的光合作用和呼吸作用；钼为氮素代谢的重要元素。 微量元素中，铁的用量较大，它对叶绿素的合成起重要作用，由于在较高pH下，FeCl3极易形成Fe（OH）3 沉淀，难以被吸收，所以多用乙二胺四乙酸二钠盐与硫酸亚铁形成的螯合物，并且单独配制。 （二）有机成分： 主要包括各种维生素和氨基酸，如硫胺素（VB1）、烟酸（VB3）、吡哆醇（VB6）、泛酸钙（VB5）、生物素、钴胺素（VB12）、叶酸等以及甘氨酸、谷氨酸、谷氨酰氨、精氨酸、天冬氨酸、天冬酰氨、丙氨酸等。有时添加水解乳蛋白或水解酪蛋白，为牛乳经酶法加工的水解产物，含有20种氨基酸的混合物，用量10－1000mg/L, 通常用于原生质体等培养。 此外肌醇是另外一种重要的有机成分，又叫环己六醇，在糖类的转化中起重要作用，此外还参与磷脂代谢及维持离子平衡等生理作用。 （三）植物生长调节物质： 植物激素是植物新称代谢中产生的天然化合物，它能以极微小的用量直接影响植物细胞的分化、分裂以及发育，影响植物的形态建成、开花、结实、成熟、衰老脱落、休眠、萌发等生理活动。 在植物组织培养中，主要通过植物激素及生长调节物质对离体的组织、器官的形态发生进行调控。包括诱导细胞分裂、愈伤组织的生长、根芽的分化以及体细胞胚胎发生等。 常用的植物激素及生长调节物涉及五大类植物激素： 1、生长素类：IAA、IBA、NAA、2，4-D 2、细胞分裂类：6-BA、KT（Kin）、ZT、2ip 3、赤霉素类：GA3、GA4、GA7 4、脱落酸：ABA 5、乙烯：ETH 1、生长素类： 主要促进细胞伸长生长和细胞分裂，诱导形