RNA逆转录RT PCR说明书.pdfVIP

Code No. RR047A 研究用 PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser (Perfect Real Time) 说明书 v201211Da 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 试剂盒外必备材料 1 ● 保 存 1 ● 特 长 2 ● 使用注意 2 ● 操作方法 2 ● Real Time PCR 4 ● 实验例 6 ● 附录 7 ● 关联产品 8 ● 制品说明 为了准确地进行基因表达量分析，必须满足只有cDNA 作为模板检出的先决条件，但Total RNA 中常常 混有基因组DNA ，并可以直接作为PCR 反应的模板进行扩增，因此会造成解析结果不准确。为了避免这 种情况发生，通常将检测用引物设计在内含子前后的外显子上，使基因组DNA 得不到扩增。但是，此方 法不适合具有单个外显子的基因或两个外显子之间所跨的内含子过小的基因，同时当基因组上有伪基因存 在时、或设计引物对基因组有非特异性扩增时、以及基因信息没被完全解析的生物种等也同样不适合于本 方法。在这种情况下，我们常常需要对Total RNA 样品进行DNase I 处理，以除去残存的基因组DNA。 而DNase I 处理通常要进行复杂的纯化操作，同时会造成RNA 的降解和损失。 PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser 是可以除去基因组DNA 进行Real Time RT-PCR 反应的专 用反转录试剂。Kit 中使用了具有较强DNA 分解活性的gDNA Eraser ，通过42℃，2 min 即可除去基因 组DNA。同时由于反转录试剂中含有抑制DNA 分解酶活性的组分，经过gDNA Eraser 处理后的样品可 以直接进行15 min 的反转录反应合成cDNA ，因此，20 min 内即可迅速完成从基因组DNA 去除到cDNA 合成的全过程。 ® ® 使用本制品合成的cDNA适用于SYBR Green分析法和TaqMan 探针分析法，可以