第十章 紫外-可见分光光度法精要.ppt

第十章 紫外可见分光光度法 一、光的波粒二象性 二、电磁波谱 三、物质对光的吸收 四、电子跃迁类型 五、常用概念 六、吸收带与结构关系 四、电子跃迁类型 2、电子跃迁类型（1）σ→σ＊跃迁 （2）n→π＊跃迁 （3）n→σ＊跃迁 （4）π→π＊跃迁（最重要的跃迁） 六、吸收带与分子结构关系 第十章 紫外可见分光光度法 一、朗伯-比尔定律 二、偏离吸收定律因素 1、物理因素 2、化学性因素 第十章 紫外可见分光光度法 一、基本组成 二、分光光度计类型 三、仪器测量误差 四、实验技术 四、实验条件选择 第十章 紫外可见分光光度法 一、定性定量分析 二、实例应用 1、定性方法 定性主要的依据→吸收光谱所具有的以下特征 吸收光谱的形状；吸收峰的数目；吸收峰的位置 （波长）；吸收峰的强度；相应的吸光系数 2、定量方法类型 1、单组分定量 ☆吸光系数法（单色光很纯）：在给定实验条件下 芦丁含量测定 ☆两组分吸收光谱部分重叠 λ1→测A1→b组分不干扰→可按单组分定量测Ca λ2→测A2→a组分干扰→不能按单组分定量测Ca ☆两组分吸收光谱完全重叠——混合样品测定 a.解线性方程组法 b.等吸收双波长消去法 c.导数光谱法 a.解线性方程组法 步骤： b.等吸收双波长法 步骤： 消除a的影响测b 消去b的影响测a 注：须满足两个基本条件 选定的两个波长下干扰组分具有等吸收点；选定的两个波长 下待测物的吸光度差值应足够大。例如阿司匹林中水杨酸含 量测定 c.导数光谱法 利用光吸收对波长导数曲线来确定和分析吸收峰位 置和强度 。一定条件下,导数值与浓度呈线性关系. 随导数阶数增加，峰数增加，峰变窄，分辨率提高 ，有力于重叠谱带及尖峰的分离和鉴别. 在一定条件下，利用带有微处理机的分光光度计可 直接绘制标准溶液的导数光谱 ；利用导数光谱的特 征对组分进行定性定量分析。此方法尤其对多组分 的同时测定、浑浊溶液测定、背景干扰严重测定。 峰谷值的波长下绘制导数值和浓度的标准曲线；在 相同条件下测定样品溶液的导数光谱，由回归方程 或标准曲线计算出待测物的浓度。 定量数据的测量：基线法；峰-谷法；峰-零法 例：浓度为2.0×10-4mol?L-1的甲基橙溶液，在不同pH值缓冲溶液中，于520nm波长下用1cm吸收池测得下列数据。pH 0.88 1.17 2.99 3.41 3.95 4.89 5.50A 0.890 0.890 0.692 0.552 0.385 0.260 0.260 计算甲基橙的Ka值。解 pH1.17时，AHIn=εHIn?CHIn （1） pH4.89时，AIn-=εIn-?CIn- （2） 1.17pH4.89时， （3）将（1）和（2）代入（3）得pH=2.99 pKa=3.33；pH=3.41 pKa=3.35；pH=3.95 pKa=3.34，取平均值pKa=3.34 0.710mg/25mL ☆对照法：在相同条件下，在线形范围内配制样品溶液和标准溶液，在选定波长处，分别测定吸光度。由朗伯-比尔定律求算。 A样品=?样品c样品b，A标=? 标c标b 因同种物质，同台仪器，相同厚度吸收池及同一波长，故： ?样= ? 标，所以C样=（A样/A标）C标 例如：维生素B12注射液含量测定：精密吸取B12注射液2.50ml，加水稀释至10.00ml摇匀。另配制B12 标准液：精密称取B12标准品25.0mg，加水溶解并稀释至1000ml，摇匀。在361nm处，用1cm吸收池分别测得样品和标准溶液的A值为0.508和0.518，求B12注射液的浓度。 解：c样品=98.1μg/ml 2、多组分定量 多组分的定量依据：A总=Aa+Ab+Ac+… 在混合组分测定中，遇到各组分吸收光谱双向重叠 相互干扰时，可根据测定目的、要求和光谱重叠的不同情况采用下列方法： 三种情况： ☆两组分吸收光谱不重叠（互不干扰） 两组分在各自λmax下不重叠→分别按单组分定量 吸收光谱和导数光谱 λ λ λ λ λ 二、实例应用1、配合物组成的测定 M + nR = MRn 若M和R均不干扰MRn 吸收 CM固定 CR从 0 开始增大，得到一系列CR/CM值不同 溶液，在同一波长下测定溶液的A，然后作A对CR/CM图 ?R = 0, ?M = 0, ?MRn 0 A CR/CM n 例：将2.481mg的某碱（BOH）的苦味酸（HA）盐溶于10